DEAE Seplife HP層析介質(zhì)是藍(lán)曉科技自主研發(fā)的一種新型高度交聯(lián)的瓊脂糖層析介質(zhì)，是將二乙胺基乙基鍵合在高流速瓊脂糖凝膠過濾層析介質(zhì)上形成的一種弱陰離子交換介質(zhì)。它具有高流速、低反壓、高動(dòng)態(tài)載量、良好的化學(xué)穩(wěn)定性和機(jī)械性能，非特異性吸附低，回收率高，方便進(jìn)行規(guī)模放大，可縮短生產(chǎn)時(shí)間，提高生產(chǎn)效率。廣泛用于生物制藥和生物工程下游蛋白質(zhì)、核酸及多肽的離子交換分離。

＊檢測(cè)條件：層析柱16mm×300mm；＊柱床高10cm；溫度25℃；流動(dòng)相為0.1mol/L NaCl。

使用方法

3.1 裝柱

裝柱按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程操作。必須保證每種材料都處于工作溫度，凝膠裝柱前需要脫氣。

3.2平衡

使用2~5倍柱床體積的上樣平衡液平衡柱子，務(wù)必使流出液的電導(dǎo)和pH同上樣緩沖液的電導(dǎo)和pH完全一致。平衡液（A液）是低濃度的緩沖溶液，如Tris 、PBS等。常用的如0.05mol/L Tris，pH8.3。

3.3上樣

（1）樣品用平衡液配制，渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。鹽濃度太大的樣品處理后再上樣。

（2）一般情況是讓目標(biāo)產(chǎn)品結(jié)合在柱子上，用平衡液洗去雜質(zhì)，再選擇一種洗脫液洗下目標(biāo)產(chǎn)品。

（3）介質(zhì)對(duì)樣品組分吸附的程度取決于樣品的帶電性質(zhì)、流動(dòng)相的離子強(qiáng)度和pH值。鹽濃度小，介質(zhì)對(duì)樣品組分吸附較牢。用 DEAE瓊脂糖層析介質(zhì)時(shí)，推薦的pH值是大于目標(biāo)產(chǎn)品等電點(diǎn)1個(gè)單位。

3.4洗脫

 可用增大鹽濃度或減小pH值進(jìn)行洗脫，常用增大鹽濃度的辦法洗脫。常用的洗脫液（B液）如：0.05mol/L Tris+2mol/L NaCl，pH8.3。

3.5再生

一般先用高鹽濃度的緩沖液（含1~2mol/L NaCl）洗或減小pH洗10倍以上柱體積，然后用結(jié)合蛋白時(shí)的平衡液洗到平衡即可。

若有失活蛋白質(zhì)或脂類物質(zhì)在再生時(shí)洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。

3.6在位清洗

（1）對(duì)于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白，可用0.5~1倍柱床體積的2M NaCl去除。

（2）對(duì)于沉淀蛋白、疏水性結(jié)合的蛋白或脂類，可以先用1倍柱床體積的0.1M NaOH沖洗，再用平衡緩沖溶液清洗直至pH呈中性。

（3）對(duì)強(qiáng)疏水性結(jié)合的蛋白、脂類等，用4~10倍柱床體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗，需注意有機(jī)溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產(chǎn)生氣泡。

3.7存儲(chǔ)

密封保存在4~30℃（保存溶液為20%乙醇）干燥、通風(fēng)、清潔處，不可冷凍；用過的柱子保存在4~8℃，20%乙醇溶液中。

3.8運(yùn)輸

運(yùn)輸中避免日曬、雨淋、重壓，嚴(yán)禁與有毒、有害物品混運(yùn)。

4.注意事項(xiàng)

（1）柱的選擇：從理論上說，只要柱足夠長，就可以獲得理想的分辨率，但由于層析柱流速同壓力梯度有關(guān)，柱長增加使流速減慢，峰變寬，分辨率降低；柱的直徑增加，使液體流動(dòng)的不均勻性增加，分辨率明顯下降。 

（2）純化過程必須嚴(yán)格控制洗脫緩沖液的pH及離子強(qiáng)度。樣品與DEAE層析介質(zhì)必須用洗脫緩沖液徹底平衡后，才能進(jìn)行柱層析。 

（3）所裝的柱床必須表面平整，無溝流及氣泡，否則應(yīng)重裝。

（4）洗脫過程中應(yīng)嚴(yán)格控制流速，且勿過快。

（5）上樣的體積要小，濃度不宜過高。

（6）加樣及整個(gè)洗脫過程中，嚴(yán)防柱面變干。

生產(chǎn)日期：見標(biāo)簽

使用期限：在適當(dāng)?shù)馁A藏條件下可貯藏5年

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