藍(lán)曉科技rProtein A填料通過FDA DMF備案

藍(lán)曉科技自主開發(fā)擁有專利的rProtein A系列蛋白A親和填料于2022年7月14日通過美國FDA DMF備案（MF#：037326），成為國內(nèi)為數(shù)不多的通過FDA DMF備案的國產(chǎn)填料供應(yīng)商。這意味著使用藍(lán)曉科技相關(guān)產(chǎn)品的客戶，在向FDA提交進(jìn)行新藥注冊的監(jiān)管備案文件中可直接引用DMF備案資料，而無需再提供有關(guān)原料和輔料的具體信息。

FDA DMF備案rProtein A填料介紹

rProtein A Seplife Suno是藍(lán)曉科技應(yīng)對抗體客戶需求推出的Protein A親和層析填料，以球形，高交聯(lián)瓊脂糖凝膠為基質(zhì)，通過自主創(chuàng)新技術(shù)將耐堿性重組蛋白A鍵合到該基質(zhì)上。可以特異性地與抗體的Fc區(qū)結(jié)合，用于抗體（單抗和多抗）的分離純化，只需一步親和層析，即可從腹水、血清或培養(yǎng)液等樣品中得到高純度的抗體。

具有以下特點

?自主研發(fā)，品質(zhì)保證，專利保證 

?高載量：5min保留時間載量80mg/ml

?耐堿性好：耐受0.5M NaOH

?完整的支持文件：RSF、DMF、MSDS、TSE/BSE

?低配基脫落：小于 2 ppm

?貨期短，1-2周可以交

微信掃描二維碼免費(fèi)申請抗體純化填料試用裝

概論

重組IgG類抗體在表達(dá)過程中經(jīng)常伴隨著相對較高水平的產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)，這些雜質(zhì)主要從重鏈同二聚化、重鏈-輕鏈錯配、不同鏈的不平衡表達(dá)和分子間錯聯(lián)引起的。盡管通過使用抗體設(shè)計策略可以提高正確配對率,但是完全避免是不可能的。同時在經(jīng)典三步法層析純化抗體的工藝中，Protein A 親和層析低pH洗脫及低pH病毒滅活的過程也會產(chǎn)生一部分聚集體，然而其中一些副產(chǎn)品與目標(biāo) IgG生物特性比較相似，它們的去除對下游工藝提出了重大挑戰(zhàn)。抗體藥制備工藝中聚集體及片段的去除是抗體藥下游工藝的重要組成部分。

Protein A親和層析階段

Protein A 親和層析時通常用pH5.0的緩沖液加1M NaCl進(jìn)行淋洗以減少洗脫液中HCP的殘留，再用pH 3.5的緩沖液一步洗脫IgG分子，沒有很好的達(dá)到去除聚集體和片段的效果，但一些研究表明在pH 線性梯度洗脫條件下半抗主要集中在前鋒，填料的分辨明顯提高了,因半抗包含一個Fc區(qū)，所以比雙抗蛋白跟填料結(jié)合力比較弱，容易洗脫下來。同時Protein A親和層析階段去除聚集體及片段也受其結(jié)合載量，特異性，分辨率等多種因素的影響。

多模式層析去除聚集體及片段

圖1：藍(lán)曉科技多模式層析結(jié)構(gòu)示意圖

多模式層析去除抗體中的聚集體及片段案例：

樣品：rProtein A Seplife Suno洗脫液(pH7.83， cond:11.84mS/cm，conc:1.3145mg/ml，NR-CE 73.6%)

多模式介質(zhì)：MA Large Scale

層析柱：5ml預(yù)裝柱

線性流速：150cm/h

A液:50mM Na2HPO4-CA，pH8.0，cond 7.5mS/cm

B液: 50mM Na2HPO4-CA，1M NaCl，pH5.0，cond 92.7mS/cm

圖2：多模式層析pH和鹽雙梯度色譜曲線圖

多模式層析去除聚集體結(jié)果

多模式層析MA Large Scale 吸附-洗脫模式下用pH和鹽雙梯度洗脫，比單pH梯度或單鹽梯度洗脫有著更高的分辨率，NR-CE的去除率可達(dá)99.6%。

凝膠過濾層析去除抗體中的聚集體及片段

烯丙基葡聚糖高分辨率凝膠過濾介質(zhì)具有獨特的化學(xué)結(jié)構(gòu)和良好的理化性能，柱層析操作時能獲得很高的流速、分辨率和回收率。該層析介質(zhì)廣泛應(yīng)用于酶、多糖、核酸和蛋白質(zhì)等生物大分子的分離純化，γ-干擾素、白介素-Ⅱ、蛋白質(zhì)A和乙肝疫苗等生物制品生產(chǎn)過程中，且廣泛用于生物大分子單體和聚集體及片段的分離。

凝膠過濾層析去除抗體中的聚集體及片段案例

樣品：rProtein A Seplife Suno洗脫峰，SEC%（聚集體18.2，主峰80.8，片段1.6）

緩沖液：50mM Tris HAc 150mM Arg HCl pH7.0

層析填料：藍(lán)曉科技Seplife S-200

層析柱：藍(lán)曉科技16mm*700mm，裝填高度620mm

流速：2ml/min

層析結(jié)果：Seplife S-200層析介質(zhì)洗脫峰SEC%(片段0，主峰99.8，聚集體0.4），聚集體及片段去除率達(dá)到98%。

參考資料

[1] Y. Li, A brief introduction of IgG-like bispecific antibody purification: methods for removing product-related impurities, Protein Expr. Purif. 155 (2019) 112–119.

[2] J.B. Ridgway, L.G. Presta, P. Carter, 'Knobs-into-holes' engineering of antibody CH3 domains for heavy chain heterodimerization, Protein Eng. Des. Sel. 9 (1996) 617–621.

免責(zé)聲明

藍(lán)曉科技、陳述人或提供人對本文件內(nèi)容(文件內(nèi)容亦有可能包括前瞻性陳述)均不做出明示或默示的保證、聲明或陳述(包括但不限于:本內(nèi)容針對任意特定目的所具有的及時性、通用性、精確性，或者關(guān)于使用本文件內(nèi)容所獲得信息無誤可信的聲明)。如因有關(guān)內(nèi)容存在錯誤、遺漏或失準(zhǔn)之處而引致的行為或結(jié)果，藍(lán)曉科技、陳述人或提供人對此不承擔(dān)責(zé)任。

本文件及其中所包含內(nèi)容的所有權(quán)利包括版權(quán)均由藍(lán)曉科技獨家所有，其中相關(guān)的“Sunresin”和“藍(lán)曉科技”字樣、圖案及相關(guān)LOGO標(biāo)識均為藍(lán)曉科技合法所有的字號、商標(biāo)和標(biāo)識。未經(jīng)藍(lán)曉科技書面同意使用，任何第三方不得以包括轉(zhuǎn)載在內(nèi)的任何方式加以使用。

本文件內(nèi)容不包含亦不應(yīng)被視為任何建議（包括但不限于醫(yī)療建議、投資建議），您基于本文件中內(nèi)容做出的任何決策，責(zé)任自負(fù)。

Sunresin, the representor or the provider does not make express or implied warranties, statements or representations on the content of this document (the content of this document may also include forward-looking statements), including but not limited to statements about the timeliness. universality and accuracy of the content for any specific purpose or with regard to the correctness of the information obtained by using the content of this document. lf any conduct or consequence is caused due to any mistake, omission or incorrectness relevant content, Sunresin, the representor or provider shall not be liable.

All rights, including copyrights, of this document and the content contained herein shall be exclusively owned by Sunresin among which the relevant words “Sunresin” and“藍(lán)曉科技”,patterns and relevant logos are the names, trademarks and logos legally owned by Sunresin. No third-party could use them by any means including reproduction without written consent from Sunresin.

The content of this document does not include and shall not be deemed as any advice (including but not limited to medical advice and investment advice. You shall be liable for any decision made by yourself based on the content of this document.