藍曉科技rProtein A填料通過FDA DMF備案

藍曉科技自主開發擁有專利的rProtein A系列蛋白A親和填料于2022年7月14日通過美國FDA DMF備案（MF#：037326），成為國內為數不多的通過FDA DMF備案的國產填料供應商。這意味著使用藍曉科技相關產品的客戶，在向FDA提交進行新藥注冊的監管備案文件中可直接引用DMF備案資料，而無需再提供有關原料和輔料的具體信息。

FDA DMF備案rProtein A填料介紹

rProtein A Seplife Suno是藍曉科技應對抗體客戶需求推出的Protein A親和層析填料，以球形，高交聯瓊脂糖凝膠為基質，通過自主創新技術將耐堿性重組蛋白A鍵合到該基質上。可以特異性地與抗體的Fc區結合，用于抗體（單抗和多抗）的分離純化，只需一步親和層析，即可從腹水、血清或培養液等樣品中得到高純度的抗體。

具有以下特點

?自主研發，品質保證，專利保證 

?高載量：5min保留時間載量80mg/ml

?耐堿性好：耐受0.5M NaOH

?完整的支持文件：RSF、DMF、MSDS、TSE/BSE

?低配基脫落：小于 2 ppm

?貨期短，1-2周可以交

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概論

重組IgG類抗體在表達過程中經常伴隨著相對較高水平的產品相關雜質，這些雜質主要從重鏈同二聚化、重鏈-輕鏈錯配、不同鏈的不平衡表達和分子間錯聯引起的。盡管通過使用抗體設計策略可以提高正確配對率,但是完全避免是不可能的。同時在經典三步法層析純化抗體的工藝中，Protein A 親和層析低pH洗脫及低pH病毒滅活的過程也會產生一部分聚集體，然而其中一些副產品與目標 IgG生物特性比較相似，它們的去除對下游工藝提出了重大挑戰。抗體藥制備工藝中聚集體及片段的去除是抗體藥下游工藝的重要組成部分。

Protein A親和層析階段

Protein A 親和層析時通常用pH5.0的緩沖液加1M NaCl進行淋洗以減少洗脫液中HCP的殘留，再用pH 3.5的緩沖液一步洗脫IgG分子，沒有很好的達到去除聚集體和片段的效果，但一些研究表明在pH 線性梯度洗脫條件下半抗主要集中在前鋒，填料的分辨明顯提高了,因半抗包含一個Fc區，所以比雙抗蛋白跟填料結合力比較弱，容易洗脫下來。同時Protein A親和層析階段去除聚集體及片段也受其結合載量，特異性，分辨率等多種因素的影響。

多模式層析去除聚集體及片段

圖1：藍曉科技多模式層析結構示意圖

多模式層析去除抗體中的聚集體及片段案例：

樣品：rProtein A Seplife Suno洗脫液(pH7.83， cond:11.84mS/cm，conc:1.3145mg/ml，NR-CE 73.6%)

多模式介質：MA Large Scale

層析柱：5ml預裝柱

線性流速：150cm/h

A液:50mM Na2HPO4-CA，pH8.0，cond 7.5mS/cm

B液: 50mM Na2HPO4-CA，1M NaCl，pH5.0，cond 92.7mS/cm

圖2：多模式層析pH和鹽雙梯度色譜曲線圖

多模式層析去除聚集體結果

多模式層析MA Large Scale 吸附-洗脫模式下用pH和鹽雙梯度洗脫，比單pH梯度或單鹽梯度洗脫有著更高的分辨率，NR-CE的去除率可達99.6%。

凝膠過濾層析去除抗體中的聚集體及片段

烯丙基葡聚糖高分辨率凝膠過濾介質具有獨特的化學結構和良好的理化性能，柱層析操作時能獲得很高的流速、分辨率和回收率。該層析介質廣泛應用于酶、多糖、核酸和蛋白質等生物大分子的分離純化，γ-干擾素、白介素-Ⅱ、蛋白質A和乙肝疫苗等生物制品生產過程中，且廣泛用于生物大分子單體和聚集體及片段的分離。

凝膠過濾層析去除抗體中的聚集體及片段案例

樣品：rProtein A Seplife Suno洗脫峰，SEC%（聚集體18.2，主峰80.8，片段1.6）

緩沖液：50mM Tris HAc 150mM Arg HCl pH7.0

層析填料：藍曉科技Seplife S-200

層析柱：藍曉科技16mm*700mm，裝填高度620mm

流速：2ml/min

層析結果：Seplife S-200層析介質洗脫峰SEC%(片段0，主峰99.8，聚集體0.4），聚集體及片段去除率達到98%。

參考資料

[1] Y. Li, A brief introduction of IgG-like bispecific antibody purification: methods for removing product-related impurities, Protein Expr. Purif. 155 (2019) 112–119.

[2] J.B. Ridgway, L.G. Presta, P. Carter, 'Knobs-into-holes' engineering of antibody CH3 domains for heavy chain heterodimerization, Protein Eng. Des. Sel. 9 (1996) 617–621.

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