絲氨酸蛋白酶是一個蛋白酶家族，它們的作用是斷裂大分子蛋白質中的肽鍵，使之成為小分子蛋白質。在哺乳類動物里面，絲氨酸蛋白酶扮演著很重要的角色，特別是在消化，凝血和補體系統方面。其激活是通過活性中心一組氨基酸殘基變化實現的，它們之中一定有一個是絲氨酸。

絲氨酸蛋白酶的特點是具有獨特的結構，由兩個在催化活性位點會聚的β-桶結構域組成。這些酶可以根據它們的底物特異性進一步分類為胰蛋白酶樣、胰凝乳蛋白酶樣或彈性蛋白酶樣。

胰蛋白酶樣

胰蛋白酶樣蛋白酶在帶正電荷的氨基酸（賴氨酸或精氨酸）之后切割肽鍵。這種特異性是由位于酶S1口袋底部的殘基驅動的（通常是帶負電荷的天冬氨酸或谷氨酸）。

胰凝乳蛋白酶樣

胰凝乳蛋白酶樣酶的S1口袋比胰蛋白酶樣蛋白酶更疏水。這導致對中到大尺寸疏水殘基的特異性，例如酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸。

類凝血酶

類彈性蛋白酶

彈性蛋白酶樣蛋白酶的S1裂縫比胰蛋白酶或胰凝乳蛋白酶樣蛋白酶小得多。因此，殘基如丙氨酸、甘氨酸和纈氨酸往往是優選的。

枯草桿菌蛋白酶

枯草桿菌蛋白酶是原核生物中的一種絲氨酸蛋白酶。枯草桿菌蛋白酶在進化上與胰凝乳蛋白酶家族無關，但具有相同的催化機制，利用催化三聯體來產生親核絲氨酸。這是用來說明趨同進化的經典例子，因為同一機制在進化過程中獨立進化了兩次。

苯甲脒類物質是絲氨酸蛋白酶的廣譜抑制劑，所以將這類物質偶聯到瓊脂糖微球上，可從各種來源的樣品中一步純化胰蛋白酶、凝血酶、尿激酶、激肽釋放酶、前激肽釋放酶等絲氨酸蛋白酶。

苯甲瞇高流速瓊脂糖微球《Benzamidine Seplife 4FF》是藍曉科技自主研發的一種特異性結合絲氨酸蛋白酶的親和層析介質，具有良好的化學穩定性和生物相容性。它是將苯甲脒類物質偶聯到高流速瓊脂糖凝膠過濾層析介質上，可以從各種來源的樣品中進一步純化胰蛋白酶，凝血酶，尿激酶，激肽釋放酶，前激肽釋放酶等絲氨酸蛋白酶。Benzamidine Seplife 4FF層析介質運用新的活化方法，具有流速高，非特異吸附少，分離效果好的特點，是純化絲氨酸蛋白酶類最合適的層析介質。

Benzamidine Seplife 4FF推薦使用條件：

?平衡緩沖液：0.05mol/L Tris-HCl 0.5mol/L NaCl pH7.4

洗脫方式一般有3種：

?競爭洗脫：在緩沖液中加入20mmol/L的p-氨基苯甲脒。

?pH洗脫：如0.05mol/L甘氨酸-HCl，pH3.0或者0.01mol/L HCl 0.5mol/L NaCl，pH2.0。

?變性洗脫：如在洗脫緩沖液中加入8M尿素或6M鹽酸胍等。

?注意：如果使用低pH洗脫條件，在收集的洗脫液中需要加入1M Tris-HCl, pH=9溶液，防止由于低pH導致的洗脫蛋白變性，一般每毫升洗脫液加入60-200ul。

?保存：保存條件為20%乙醇/乙酸緩沖液(乙酸緩沖液pH=4)，儲存溫度2～8℃。

更多信息請聯系蘇州藍曉生物：0512-65160522

應用案例:胰蛋白酶親和層析純化

層析條件

層析柱：26mm*200mm ；裝柱高度：100mm；

裝填填料:Benzamidine Seplife 4FF

流速：5 ml/min；

緩沖液A：Tris-HCl + NaCl；

緩沖液B：Tris-HCl；

樣品說明：胰糜蛋白酶粗品

圖1：Benzamidine Seplife 4FF純化胰蛋白酶色譜圖

親和層析結果分析：應用案例:胰蛋白酶親和層析純化

分別對原液、流穿液、洗脫液中蛋白濃度和胰糜蛋白酶的效價進行測定。蛋白濃度通過紫外吸收法，效價測定根據中國藥典2015年版胰糜蛋白酶的效價測定方法。

中國藥典2015年版規定糜蛋白酶的效價不小于1000單位/mg；胰蛋白酶效價不得少于2500單位/mg。由此可以看出藍曉科技開發生產的Benzamidine Seplife 4FF親和層析介質可以用來生產滿足藥典要求的胰蛋白酶和糜蛋白酶。