問:His標簽蛋白鎳柱純化有雜帶怎么辦？
1.樣品本身的的屬性，His蛋白容易被體系中的蛋白酶降解時，此時就要在樣品中加入蛋白酶抑制劑。避免在純化過程中His蛋白被降解，呈現出純化后純度下降。
2.His蛋白和其它蛋白結合在一起，純化后也呈現出純度不夠，這時就需要考慮減少蛋白分子之間的作用力，比如加入2% Triton X-100或者加入10-50%的甘油等減少分子間的作用力。
3.理解鎳柱純化蛋白的原理，除帶有His標簽的蛋白可以可以鎳柱結合，鎳柱也能和帶有半胱氨酸等氨基酸殘基的蛋白結合。理解僅靠一步鎳柱純化90%左右純度是正常的，若需要更高的純度，則需要繼續純化。比如鎳柱洗脫峰再多模式層析介質（MMC/MA Large Scale )繼續純化.
4.層析體系需要優化，緩沖體系的pH要在7.5-8.3之間，添加200-500mM氯化鈉減少非特異性吸附，上樣完后要徹底清洗，保證填料孔內，顆粒間未結合的蛋白全部洗出后，在開始洗脫，保證上完樣后，清洗在10CV以上。洗脫過程需要摸索咪唑的強度梯度，用連續咪唑梯度來摸索洗脫濃度。
5.層析柱裝填的疏密不合適，層析柱的分配器分配的不均勻。這種情況在工業生產中影響也很大，會影響其純度等。
6.層析填料上端，和柱頭分配器間的體積太大，大中大型層析柱使用過程中，液距控制在0.5cm以內，避免影響整個層析過程。
