絲氨酸蛋白酶

絲氨酸蛋白酶是一個蛋白酶家族，它們的作用是斷裂大分子蛋白質中的肽鍵，使之成為小分子蛋白質。在哺乳類動物里面，絲氨酸蛋白酶扮演著很重要的角色，特別是在消化，凝血和補體系統(tǒng)方面。其激活是通過活性中心一組氨基酸殘基變化實現(xiàn)的，它們之中一定有一個是絲氨酸。

絲氨酸蛋白酶的特點是具有獨特的結構，由兩個在催化活性位點會聚的β-桶結構域組成。這些酶可以根據(jù)它們的底物特異性進一步分類為胰蛋白酶樣、胰凝乳蛋白酶樣或彈性蛋白酶樣。

胰蛋白酶樣

胰蛋白酶樣蛋白酶在帶正電荷的氨基酸（賴氨酸或精氨酸）之后切割肽鍵。這種特異性是由位于酶S1口袋底部的殘基驅動的（通常是帶負電荷的天冬氨酸或谷氨酸）。

胰凝乳蛋白酶樣

胰凝乳蛋白酶樣酶的S1口袋比胰蛋白酶樣蛋白酶更疏水。這導致對中到大尺寸疏水殘基的特異性，例如酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸。

類凝血酶

這些包括凝血酶、組織激活型纖溶酶原和纖溶酶。已發(fā)現(xiàn)它們在凝血和消化以及神經(jīng)退行性疾病（如阿爾茨海默氏癥和帕金森氏誘發(fā)的癡呆癥）的病理生理學中發(fā)揮作用。

類彈性蛋白酶

彈性蛋白酶樣蛋白酶的S1裂縫比胰蛋白酶或胰凝乳蛋白酶樣蛋白酶小得多。因此，殘基如丙氨酸、甘氨酸和纈氨酸往往是優(yōu)選的。

枯草桿菌蛋白酶

枯草桿菌蛋白酶是原核生物中的一種絲氨酸蛋白酶。枯草桿菌蛋白酶在進化上與胰凝乳蛋白酶家族無關，但具有相同的催化機制，利用催化三聯(lián)體來產生親核絲氨酸。這是用來說明趨同進化的經(jīng)典例子，因為同一機制在進化過程中獨立進化了兩次。

苯甲瞇

苯甲脒類物質是絲氨酸蛋白酶的廣譜抑制劑，所以將這類物質偶聯(lián)到瓊脂糖微球上，可從各種來源的樣品中一步純化胰蛋白酶、凝血酶、尿激酶、激肽釋放酶、前激肽釋放酶等絲氨酸蛋白酶。

苯甲瞇高流速瓊脂糖微球親和介質

苯甲瞇高流速瓊脂糖微球《Benzamidine Seplife 4FF》是藍曉科技自主研發(fā)的一種特異性結合絲氨酸蛋白酶的親和層析介質，具有良好的化學穩(wěn)定性和生物相容性。它是將苯甲脒類物質偶聯(lián)到高流速瓊脂糖凝膠過濾層析介質上，可以從各種來源的樣品中進一步純化胰蛋白酶，凝血酶，尿激酶，激肽釋放酶，前激肽釋放酶等絲氨酸蛋白酶。Benzamidine Seplife 4FF層析介質運用新的活化方法，具有流速高，非特異吸附少，分離效果好的特點，是純化絲氨酸蛋白酶類最合適的層析介質。

Benzamidine Seplife 4FF推薦使用條件：

?平衡緩沖液：0.05mol/L Tris-HCl 0.5mol/L NaCl pH7.4

洗脫方式一般有3種：

?競爭洗脫：在緩沖液中加入20mmol/L的p-氨基苯甲脒。

?pH洗脫：如0.05mol/L甘氨酸-HCl，pH3.0或者0.01mol/L HCl 0.5mol/L NaCl，pH2.0。

?變性洗脫：如在洗脫緩沖液中加入8M尿素或6M鹽酸胍等。

?注意：如果使用低pH洗脫條件，在收集的洗脫液中需要加入1M Tris-HCl, pH=9溶液，防止由于低pH導致的洗脫蛋白變性，一般每毫升洗脫液加入60-200ul。

?保存：保存條件為20%乙醇/乙酸緩沖液(乙酸緩沖液pH=4)，儲存溫度2～8℃。