介質的認知

在層析過程之前我們要對層析介質的耐壓性，化學穩定性（如化學耐受性），物理穩定性（如壓縮因子），保存條件，分離原理，材質做足夠的認識，避免不合適的層析過程影響填料的壽命衰減（如IDA-Ni應避免接觸氧化劑還原劑和螯合劑)。如藍曉科技層析介質認識，我們需要了解不同的縮寫或者字母代表的是什么：

?Seplife :藍曉科技層析介質商標
?FF——Fast Flow ：6%高流速瓊脂糖微球，粒徑范圍45-165um,平均粒徑90um
?4FF——4Fasr Flow：4%高流速瓊脂糖微球，粒徑范圍45-165um,平均粒徑90um
?BB——Big Beads：6%大顆粒高流速瓊脂糖微球，粒徑范圍100-300um,平均粒徑200um
?HP——High Performance ,6%高分辨率，粒徑范圍25-44um，平均粒徑34um
?XL——6%高流速，高載量瓊脂糖微球，粒徑范圍45-165um,平均粒徑90um
?Large Scale ——大規模，高剛性瓊脂糖微球，粒徑范圍45-165um,平均粒徑90um
?Large Scale HP——高剛性高分辨率瓊脂糖微球，粒徑范圍25-44um，平均粒徑34um
?LS——Low Sub：低配基密度
?HS——High Sub: 高配基密度
?SF——Superfine :超細顆粒，葡聚糖微球，干粉粒徑20-50um
?F——Fine：細顆粒，葡聚糖微球，干粉粒徑20-80um
?M——Medium: 中等粒徑，葡聚糖微球，干粉粒徑50-150um
?C——Coarse: 粗粒徑，葡聚糖微球，干粉粒徑100-300um
?cm/h——線性流速（cm/h）=流速（ml/min）*60/層析柱半徑（cm）平方*圓周率（π）。

樣品的認知

在層析過程要對樣品做足夠的認知，包括樣品的濃度，樣品的組成等做一定的了解，如真核細胞分泌表達的樣品，要了解其上游工藝，培養基組成，培養過程等的一些添加劑是否對填料的性能及壽命衰減會有影響，及樣品的酸堿度，離子強度，濁度等做足夠的了解，必要的時候要進行再次澄清處理及體系置換。

樣品的前處理

在了解完樣品的情況后，結合層析工藝，對樣品做適當的前處理，可以有效降低介質的壽命衰減。

?樣品中的顆粒物質在層析前要進行澄清處理，澄清處理的越徹底，對填料壽命衰減影響越小。

?樣品的粘度要盡量小，必要時候要加核酸酶處理，降低大片段核酸含量及粘度。

?樣品的組份應滿足層析工藝且對填料的性能沒有影響，必要時可以用藍曉科技的凝膠過濾介質Seplife G-25 M介質對樣品進行置換體系處理。

層析工藝過程

?優化柱床高度使其既滿足工藝指標，又可減少反壓

?優化層析緩沖液使其對介質壽命衰減的影響最小（比如洗脫強度的合理溫和可以降低配基的脫落和基質的老化）。

?優化層析過程減少非特異性吸附等也可以有效降低介質壽命的衰減過程。

維護保養

不同的介質及不同的污染物清洗方法不同，清洗既要保證清洗效果同時要減少對層析介質的損傷，還要避免清洗試劑對介質的二次污染，選擇合適的清洗方法非常重要。依據層析介質的污染物的種類進行清洗方法，關注此公眾號，下次分別介紹不同污染物清洗方法的選擇及介質維護保養全過程。

清洗是去除再生沒有去除的污染物，那么我們就要了解污染物的來源，污染物與物料及工藝階段，工藝過程聯系緊密。

1）捕獲階段，物料通常比較復雜，含有大量的雜質，色素，內素素等，再生往往難以去除干凈，那么待清洗去除的物質也很復雜，清洗過程也很復雜，可能需要多種模式配合作用，同時清洗的頻率和強度都要高。通常使用1個循環后就要清洗一次。

2）中度純化階段，物料已經去除了大部分雜質，通過再生殘留在介質上的污染物就很少了，清洗過程和頻率比捕獲階段就要低很多。使用5-10個循環后就需要清洗一次。

3）精純階段，物料已很純凈，只含有微量的雜質，再生通常就可以達到清洗的目的，此時清洗的頻率和強度就更低。根據小試確定的清洗需要開始的狀態進行清洗。

清洗過程注意事項：

?清洗過程要綜合考慮污染物的類型及介質的種類，清洗的同時要減少對介質的損傷。

?清洗時通常需要多種方法組合使用，清洗過程并非是固定不變的。

?清洗試劑應選擇純度高的試劑，避免二次污染。

?清洗之后要立即洗到中性保存。

?清洗狀態的確定及方法的確定要結合整個工藝過程。

?清洗之后要對清洗過程進行驗證，保證清洗目的實現，可通過測定載量，流速等介質的性能指標驗證

層析設備的影響

層析柱的分布器，清洗死角，密封性，材質和介質及樣品及層析過程緩沖液的兼容性也會影響層析介質的壽命。