抗體是一種由效應B細胞分泌的免疫球蛋白，協助免疫系統鑒別、中和抗原或其他外來物質。單克隆抗體是由單一B細胞克隆產生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體。

21世紀隨著生物技術，分子克隆技術，細胞培養技術及免疫治療，免疫學的快速發展，單克隆抗體也進入了快速發展期，在腫瘤治療及免疫療法中單克隆抗體發揮極其重要的作用。

單克隆抗體制備工藝中，下游工藝占整個工藝成本的60%以上，下面系統全面的介紹單克隆抗體的下游工藝解決方案。

用于腫瘤治療及免疫療法的單克隆抗體工藝趨于成熟，人源或人源化的單抗，由CHO細胞培養分泌獲得。CHO細胞用蘇州藍曉生物科技的Seplife LX-MC-dex1微載體培養。微載體培養是目前公認最具發展前途的一種動物細胞大規模培養技術，其兼具懸浮培養和貼壁培養的優點，且容易放大。藍曉科技的微載體廣泛應用在疫苗、單抗、基因治療病毒載體等生物制品的大規模生產中，藍曉科技自主研發的Seplife LX-MC-dex1細胞培養微載體幾乎適合所有貼壁細胞（如Vero、CHO、293T及MDCK等），細胞可貼附微球 2D 表面生長，1g的Seplife LX-MC-dex1微載體提供 4400 cm2的表面積給細胞貼附。

圖2：Seplife LX-MC-dex1細胞培養微載體培養效果

CHO細胞培養后先經過離心的方式去除細胞及細胞碎片，也可用微濾或者深層過濾的方式去除細胞及細胞碎片。去除細胞和細胞碎片后用rProtein A親和層析介質經親和層析捕獲，把單抗從培養液中快速的捕獲出來，此步驟可以去除大量的HCP，單抗去折疊片段，病毒及HCD和培養基組份物質。親和層析捕獲后，進一步用強陽離子交換層析SP Seplife Large Scale層析介質繼續純化捕獲的單抗，進一步去除少量的HCP,HCD及第1步親和層析捕獲時rProtein A親和介質脫離的親和配基rProtein A。強陽離子交換層析后，通過調pH的方式用pH3.7-3.8的環境進行病毒滅活。低pH病毒滅活后，在通過陰離子交換層析Q Seplife Large Scale流穿模式，讓單抗流穿，層析介質吸附痕量的雜質進一步純化。陰離子交換層析后，可以通過超濾的方式進行濃縮。濃縮再用20nm的納濾膜過濾除病毒。除病毒后就進入制劑階段。隨著技術和材料的發展，單抗下游工藝解決方案也呈現出多樣性。

圖3：單抗下游工藝的多樣性

單抗下游純化工藝-經典工藝

圖4：單抗下游純化工藝經典工藝過程

圖5：rProtein A親和介質純化蛋白原理圖

Protein A是金黃色葡萄球菌表面的蛋白，分子量42kDa，有5個不同的結構域可以結合IgG的Fc片段，具有很強的特異性親和力，每個Protein A分子至少可以結合兩個IgG分子。

隨著技術的發展，重組Protein A在不斷的改進，目前用于單抗捕獲的rProtein A多點和瓊脂糖微球等填料基質偶聯，減少了使用過程中配基脫落，同時為滿足生物制藥工藝消毒的要求，可以耐受0.1-0.5M氫氧化鈉的處理。

圖6：rProtein A純化單抗的過程

圖7：rProteinA親和介質連續流層析過程示意圖

Protein A親和層析捕獲工藝流程可參考上面圖片的工藝流程，同時我們要系統的設計實驗方案，基于淋洗條件，洗脫方式，保留時間等要系統的利用DOE實驗開發最佳工藝過程。

rProteinA Seplife Suno

性能參數

rProteinA Seplife Suno

載量與駐留時間的關系

rProteinA Seplife Suno

和國外品牌對比

rProteinA Seplife Suno

訂購信息

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CHO細胞培養微載體

Seplife LX-MC-dex1

親和介質

rProtein A Seplife Suno

離子交換介質

Q/SP Seplife Large Scale

混合模式層析介質

MA Seplife Large Scale

凝膠過濾層析介質

Seplife S-100/S-200

蘇州藍曉生物科技有限公司是藍曉科技（股票代碼：SZ 300487）全資子公司，依托藍曉科技20多年在分離吸附材料領域豐富的經驗和技術積累，在后疫情時代及藥品集采的時代背景下應運而生。蘇州藍曉生物科技，在藍曉科技雄厚資本的支持下，在藍曉科技生命科學事業部數10年產品研發和技術積累的基礎上，匯聚50多人的研發團隊，提供從細胞培養及分離純化到系統裝置完整的解決方案，我們將全力助力生命科學及生物制藥產業的高質量發展。