用蘇州藍曉生物科技的Seplife? LX-MC-dex1微載體培養MDCK細胞。微載體培養是目前公認最具發展前途的一種動物細胞大規模培養技術，其兼具懸浮培養和貼壁培養的優點，且容易放大。藍曉科技的微載體廣泛應用在疫苗、單抗、基因治療病毒載體等生物制品的大規模生產中，藍曉科技自主研發的Seplife? LX-MC-dex1細胞培養微載體幾乎適合所有貼壁細胞（如Vero、CHO、293T及MDCK等），細胞可貼附微球 2D 表面生長，1g的Seplife? LX-MC-dex1微載體提供 4400 cm2的表面積給細胞貼附。

圖1：Seplife? LX-MC-dex1細胞培養微載體培養效果（來源：藍曉科技）

02、固液分離

細胞培養后，先經過離心的方式固液分離去除培養基中水及培養基組分中的物質；

03、細胞洗滌

固液分離后收集細胞，可以用生理鹽水重懸細胞，對細胞進行洗滌（工業上此工序可省略），保持細胞破碎時破碎的是純凈的細胞；

04、細胞重懸

細胞洗滌后，重懸細胞，重懸細胞要注意重懸緩沖液的種類及和重懸后的細胞濃度，濃度影響后面破碎效率，緩沖液影響后續純化過程，盡量保持和下游工藝的合理銜接，避免置換緩沖液；

05、細胞破碎

重懸后可以用去污劑Tween20.Tween80.Triton X-100等破碎細胞，或者通過凍融的方式破碎細胞，破碎后可以測定病毒滴度，保證病毒全部釋放出來；

06、破碎液固液分離

破碎后再次離心固液分離，收集上清；

07、澄清

上清液在用微濾（GF）的方式進行澄清處理（要特別注意澄清度，澄清度是影響后續層析填料及超濾（UF)膜組件使用壽命的關鍵因素之一），澄清度可以通過測濁度的方式檢測；

08、核酸酶處理

澄清后加入核酸酶處理，降解核酸降低粘度，考慮核酸酶活加入的量及酶處理時間，核酸酶處理時要緩慢攪拌，保證處理的均勻性；

09、緩沖液置換

用超濾膜組件進行緩沖液置換，保證緩沖體系適合下一步層析過程，同時置換時也可以適當濃縮，注意超濾時的跨膜壓及超濾時剪切力對病毒完整性的影響；若8工序后的樣品不影響粗純的層析過程（需要從細胞重懸工序開始合理選擇緩沖液，及破碎方式的選擇考慮）此工序可省去；

10、粗純

減毒流感病毒載體新冠疫苗可用陰離子交換層析吸附——洗脫模式(大多數病毒在中性pH環境中都帶負電荷）進行粗純及濃縮，推薦使用蘇州藍曉生物高剛性瓊脂糖微球陰離子交換填（Seplife large scale Q )，離子交換層析的過程，病毒被吸附在填料上，吸附的過程也會把病毒濃縮在填料上，蘇州藍曉生物的Seplife large scale Q填料吸附減毒流感病毒載體的載量在1-3mg/ml(與工藝緩沖液，層析時保留時間等有關），用陰離子交換層析吸附——洗脫模式粗純減毒流感病毒載體新冠疫苗時，可以運用DOE，系統的表征各個層析工藝參數，達到最優的純化結果（回收率和純度），減輕后續精純工序的壓力；

同時也可以用蘇州藍曉生物的混合模式層析介質Seplife? Suncore 700來粗純，病毒顆粒被排阻在惰性層外流穿，HCP,HCD,內毒素等雜質進入活性區域和介質以靜電力，疏水作用力結合，從而實現分離。

蘇州藍曉生物科技有限公司

細胞培養微載體

Seplife? LX-MC-dex1

高剛性瓊脂糖微球陰離子交換介質

Seplife large scale Q

高剛性高分辨率瓊脂糖微球陰離子交換介質

Seplife large scale Q HP

多模式復合型層析填料

Seplife? Suncore 700

凝膠過濾層析填料

Seplife 4FF

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