Seplife G75 M葡聚糖層析介質是一種具有三維網狀結構的高分子化合物,它是由葡聚糖加入交聯劑環氧氯丙烷通過醚鍵互相交聯聚合而成,交聯度越大,網孔結構就越緊密,吸水后的體積膨脹就越小,能允許進入層析介質內部的分子的分子量也就越小,反之亦然。層析時,大于層析介質孔徑的大分子,被阻于凝膠相外,沿著層析介質顆粒之間的間隙走,下移速度最快,故最先洗脫下來,中等大小的分子進入部分層析介質孔中,洗脫速度次之,而小分子因為能夠進入全部層析介質孔中,受到阻力最大,故最后被洗脫下來,由此,物質得到分離和純化。Seplife G75 M葡聚糖層析介質適用于脫鹽、多肽分離、清洗生物提取液、分子量測定。
產品牌號 | Seplife G75 M |
外觀 | 白色球狀,無臭無味 |
粒徑(干,μm) | 40~120 |
溶脹度 | 12~15 |
分離范圍 | 3000~8×104 |
耐壓 | 遵從Darcy 定律 |
流速 | 遵從Darcy 定律 |
pH穩定性 | 2~10 |
應用 | 適用于脫鹽、多肽分離、清洗生物提取液、分子量測定 |
使用方法
3.1預處理
葡聚糖凝膠過濾層析介質一般是干粉狀態,使用前必須在過剩的緩沖溶液(蒸餾水)中進行溶脹(室溫溶脹過夜,或者在沸水中溶脹1h,避免使用磁力攪拌、藥匙或者玻璃棒攪拌造成填料損壞)。溶脹后,使用緩沖液進行調節,形成濃稠的漿液,75%(體積百分比)左右,再進行脫氣。
注:在溶脹前加入緩沖溶液(蒸餾水)使其自然沉降,自然沉降后若上層溶液中漂浮的凝膠碎片顆粒多,需要重復多次漂洗將其除去,防止層析時阻塞凝膠柱,影響流速。
3.2 裝柱
裝柱按照標準操作規程操作。必須保證每種材料都處于工作溫度,凝膠裝柱前需要脫氣。
3.3平衡
使用2~5倍柱床體積的上樣平衡液平衡柱子,務必使流出液的電導和pH同上樣緩沖液的電導和pH完全一致。
3.4上樣
(1)介質對樣品組分的分離是按組分分子量大小進行的,分子量大的先流出來。
(2)凝膠過濾的上樣量一般為5%的柱床體積,我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積,視分離情況可以調整;脫鹽時上樣量可以達到20%的柱床體積,柱高的選擇也與分離要求相關,柱高控制在40-50 cm 以下,過高的凝膠層會引起較大的反壓,應當盡可能避免。難分離物質要有一定柱高和流速控制,脫鹽時高徑比為5:1即可。
(3)樣品中如有雜質或沉淀應該在上樣前過濾或離心除去,樣品的粘度不能過高,否則影響分離效果。
3.5洗脫
可以采用無鹽水,也可以采用用平衡緩沖液做洗脫劑進行洗脫。在平衡緩沖液中加入NaCl等梯度洗脫或者鹽梯度洗脫都可以完全分離。
3.6在位清洗
凝膠使用10次后作一次CIP,目的是去除柱床內沉淀的及頑固殘留的蛋白。方法是以40cm/h用1M氫氧化鈉反向洗4個柱床體積,再以至少3個柱床體積平衡緩沖液再生。
3.7存儲
干粉保存在4~30℃,干燥、通風、清潔處;溶脹后的介質保存在4~8℃,20%乙醇溶液中,避免與氧化劑接觸,不可冷凍。
3.8運輸
運輸中避免日曬、雨淋、重壓,嚴禁與有毒、有害物品混運。
4.注意事項
(1)樣品必須澄清沒有顆粒。
(2)樣品與層析介質必須用洗脫緩沖液徹底平衡后,才能進行柱層析。
(3)所裝的柱床必須表面平整,無溝流及氣泡,否則應重裝。
(4)洗脫過程中應嚴格控制流速,且勿過快。
(5)加樣及整個洗脫過程中,嚴防柱面變干。
(6)本品應避免與氧化劑接觸,避免長時間暴露在空氣中。
產品牌號 | 貨號 | 包裝規格 |
Seplife G75 M | D1007410M | 25g |
D1007411M | 100g | |
D1007412M | 500g | |
D1007413M | 1kg | |
D1007414M | 5kg | |
D1007415M | 10kg |
生產日期:見標簽
使用期限:在適當的貯藏條件下可貯藏5年
注冊人名稱/生產企業:西安藍曉科技新材料股份有限公司
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