Seplife G25 F葡聚糖層析介質(zhì)是一種具有三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的高分子化合物，它是由葡聚糖加入交聯(lián)劑環(huán)氧氯丙烷通過醚鍵互相交聯(lián)聚合而成，交聯(lián)度越大，網(wǎng)孔結(jié)構(gòu)就越緊密，吸水后的體積膨脹就越小，能允許進(jìn)入層析介質(zhì)內(nèi)部的分子的分子量也就越小，反之亦然。層析時，大于層析介質(zhì)孔徑的大分子，被阻于凝膠相外，沿著層析介質(zhì)顆粒之間的間隙走，下移速度最快，故最先洗脫下來，中等大小的分子進(jìn)入部分層析介質(zhì)孔中，洗脫速度次之，而小分子因為能夠進(jìn)入全部層析介質(zhì)孔中，受到阻力最大，故最后被洗脫下來，由此，物質(zhì)得到分離和純化。Seplife G25葡聚糖層析介質(zhì)分離范圍為1000~5000，適用于脫鹽、肽與其它小分子的分離。

交聯(lián)葡聚糖凝膠微球G25的排阻極限測定

Seplife G25排阻極限

使用方法

4.1預(yù)處理

葡聚糖凝膠過濾層析介質(zhì)一般是干粉狀態(tài)，使用前必須在過剩的緩沖溶液中進(jìn)行溶脹（室溫溶脹過夜，或者在沸水中溶脹1h，避免使用磁力攪拌、藥匙或者玻璃棒攪拌造成填料損壞）。溶脹后，使用緩沖液進(jìn)行調(diào)節(jié)，形成濃稠的漿液，75%（體積百分比）左右，再進(jìn)行脫氣。

4.2 裝柱

裝柱按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程操作。裝柱前，必須保證每種材料都處于工作溫度，緩沖液、填料的溫度須一致（室溫）。葡聚糖凝膠過濾層析介質(zhì)遵從Darcy法則，如果流速加倍，則柱壓也會加倍。

4.3平衡

使用2~5倍柱床體積的上樣平衡液平衡柱子，務(wù)必使流出液的電導(dǎo)和pH同上樣緩沖液的電導(dǎo)和pH完全一致。

4.4上樣

（1）介質(zhì)對樣品組分的分離是按組分分子量大小進(jìn)行的，分子量大的先流出來。

（2）凝膠過濾的上樣量一般為5%的柱床體積，我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積，視分離情況可以調(diào)整；脫鹽時上樣量可以達(dá)到20%的柱床體積，柱高的選擇也與分離要求相關(guān)，柱高控制在40-50 cm 以下，過高的凝膠層會引起較大的反壓，應(yīng)當(dāng)盡可能避免。難分離物質(zhì)要有一定柱高和流速控制，脫鹽時高徑比為5：1即可。

（3）樣品中如有雜質(zhì)或沉淀應(yīng)該在上樣前過濾或離心除去，樣品的粘度不能過高，否則影響分離效果。

4.5洗脫

可以采用無鹽水，也可以采用用平衡緩沖液做洗脫劑進(jìn)行洗脫。在平衡緩沖液中加入NaCl等梯度洗脫或者鹽梯度洗脫都可以完全分離。

4.6在位清洗

凝膠使用10次后作一次CIP，目的是去除柱床內(nèi)沉淀的及頑固殘留的蛋白。方法是以40cm/h用1M氫氧化鈉反向洗4個柱床體積，再以至少3個柱床體積平衡緩沖液再生。

4.7存儲

干粉保存在4~30℃，干燥、通風(fēng)、清潔處；溶脹后的介質(zhì)保存在4~8℃，20%乙醇溶液中，避免與氧化劑接觸，不可冷凍。

4.8運輸

運輸中避免日曬、雨淋、重壓，嚴(yán)禁與有毒、有害物品混運。

5.注意事項

（1）樣品必須澄清沒有顆粒。

（2）樣品與層析介質(zhì)必須用洗脫緩沖液徹底平衡后，才能進(jìn)行柱層析。 

（3）所裝的柱床必須表面平整，無溝流及氣泡，否則應(yīng)重裝。

（4）洗脫過程中應(yīng)嚴(yán)格控制流速，且勿過快。

（5）加樣及整個洗脫過程中，嚴(yán)防柱面變干。

（6）本品應(yīng)避免與氧化劑接觸，避免長時間暴露在空氣中。 

生產(chǎn)日期：見標(biāo)簽

使用期限：在適當(dāng)?shù)馁A藏條件下可貯藏5年

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