rProtein A Seplife Suno是藍曉科技應對抗體客戶需求推出的Protein A親和層析填料,以球形,高交聯(lián)瓊脂糖凝膠為基質(zhì),通過自主創(chuàng)新技術(shù)將耐堿性重組蛋白A鍵合到該基質(zhì)上。可以特異性地與抗體的Fc區(qū)結(jié)合,用于抗體(單抗和多抗)的分離純化,只需一步親和層析,即可從腹水、血清或培養(yǎng)液等樣品中得到高純度的抗體。
產(chǎn)品技術(shù)參數(shù)
產(chǎn)品名稱 | rProtein A Seplife Suno |
外觀 | 球狀凝膠,無臭無味 |
基質(zhì) | 高交聯(lián)瓊脂糖微球 |
配基 | 耐堿重組Protein A |
流速(cm/h) | >250cm/h(0.1MPa) |
耐壓(MPa) | 0.3MPa |
粒徑(μm) | 65μm |
載量 | 70mg/ml |
配基密度 | 8~9mg/ml |
耐堿性 | 0.1-0.5M NaOH |
載量和駐留時間關(guān)系
壓力流速曲線
備注:層析柱規(guī)格:16mm×400mm
耐堿測試
層析柱測試完DBC(10%流穿)后,用0.5M NaOH洗脫15min,室溫下放置24h,然后測試DBC變化。
填料名稱 | 泡堿前DBC(mg/ml) | 泡堿后DBC(mg/ml) | 下降百分比% |
國外品牌 | 60.3 | 46.7 | 22.6 |
rProtein A Seplife Suni | 71.5 | 56.4 | 21.0 |
抗體純化應用
某抗體發(fā)酵液純化過程,從載量,純度,收率,洗脫體積等方面平行對比國外品牌LX,結(jié)果表明各方面數(shù)據(jù)與參比填料接近。
實驗條件:
儀器 | AKTA Pure 150 |
層析柱 | r-ProteinA Seplife Suni(Hitrap 1ml預裝柱) |
預平衡 | 20mM PB+150mM NaCl,pH7.4 |
淋洗 | 20mM PB+150mM NaCl,pH7.4 |
洗脫 | 100mM檸檬酸鈉,pH3.0 |
CIP | 0.5M NaOH |
實驗結(jié)果:
填料名稱 | 載量(mg/ml) | SEC純度(%) | 收率(%) |
國外品牌LX | 53.5 | 97.2 | 99.4 |
rProtein A Seplife Suni | 54.6 | 96.9 | 99.2 |
使用方法
3.1 裝柱
裝柱按照標準操作規(guī)程操作,必須保證每種材料都處于工作溫度。r-ProteinA Seplife Suno填料可使用常規(guī)瓊脂糖層析介質(zhì)裝柱方法。
3.2平衡
用3-5CV預平衡液平衡層析柱,直至pH和電導率保持不變。
3.3上樣
樣品的預處理:樣品離心后,用0.45μm濾膜過濾,然后上樣,以免堵塞層析柱。上樣量根據(jù)樣品的性質(zhì)和層析介質(zhì)的量進行選擇,一般可通過測試該樣品在層析柱上的DBC作為參考。
3.4洗脫
一般利用低pH緩沖液進行洗脫,選擇pH3.0-3.5的緩沖液:如0.1mol/L甘氨酸-HCl,pH3.0,實際洗脫條件可優(yōu)化。洗脫后,應立刻中和緩沖液,將收集到的抗體溶液中和至中性(pH7.4左右),以維持抗體的生物活性,一般中和液為1mol/L Tris-HCl,pH9-10。
3.5清洗
CIP方法:
r-ProteinA Seplife Suno是一種耐堿親和介質(zhì),可以耐受 0.1M-0.5M NaOH溶液的清洗,一般使用大于3CV的 0.1-0.5 M NaOH,接觸時間為15 min;然后用5CV的平衡液沖洗至中性。
注:由于發(fā)酵液純化過程會引入部分雜質(zhì)吸附在層析柱上,造成壓力升高,在做CIP時,可考慮一定次數(shù)后進行up flow。
3.6存儲
密封保存在4~8℃(保存溶液為20%乙醇)干燥、通風、清潔處,不可冷凍;用過的柱子保存在4~8℃,20%乙醇溶液中。
3.7運輸
運輸中避免日曬、雨淋、重壓,嚴禁與有毒、有害物品混運。
4.注意事項
(1)該介質(zhì)從冷室或冰箱中取出后最好在室溫下恢復到室溫,然后緩慢搖勻后裝柱,以免產(chǎn)生氣泡影響柱效;
(2)一般Protein A親和層析填料裝柱高度15-25cm,根據(jù)實際情況做合理的高度選擇;
(3)發(fā)酵液上樣前做好澄清過濾操作,以防堵塞層析柱;
(4)凝膠用低pH緩沖液洗脫的時間應盡可能短,洗脫后用中性緩沖液盡快洗到pH中性,以延長介質(zhì)的使用壽命。
產(chǎn)品牌號 | 貨號 | 包裝規(guī)格 |
rProtein A Seplife Suno | A4093101 | 5ml |
A4093102 | 25ml | |
A4093103 | 100ml | |
A4093104 | 500ml | |
A4093105 | 1L | |
A4093106 | 5L | |
A4093107 | 10L |
生產(chǎn)日期:見標簽
使用期限:在適當?shù)馁A藏條件下可貯藏5年
注冊人名稱/生產(chǎn)企業(yè):西安藍曉科技新材料股份有限公司
注冊人住址/生產(chǎn)地址:西安市高新開發(fā)區(qū)錦業(yè)路135號藍曉科技園
售后服務單位:西安藍曉科技新材料股份有限公司
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