DEAE  Large Scale層析介質(zhì)是藍(lán)曉科技自主研發(fā)的一種新型高度交聯(lián)的瓊脂糖層析介質(zhì)，是將二乙胺基乙基鍵合在高流速瓊脂糖微球上形成的一種弱陰離子交換介質(zhì)，其具有高流速、低反壓、高動態(tài)載量、良好的化學(xué)穩(wěn)定性和機(jī)械性能，非特異性吸附低，回收率高，方便進(jìn)行規(guī)模放大，可縮短生產(chǎn)時間，提高生產(chǎn)效率。廣泛用于生物制藥和生物工程下游蛋白質(zhì)、核酸及多肽的離子交換分離。

使用方法

3.1 裝柱

裝柱按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程操作。必須保證每種材料都處于工作溫度，凝膠裝柱前需要脫氣。

3.2平衡

使用2~5倍柱床體積的上樣平衡液平衡柱子，務(wù)必使流出液的電導(dǎo)和pH同上樣緩沖液的電導(dǎo)和pH完全一致。平衡液（A液）是低濃度的緩沖溶液，如Tris 、PBS等。常用的如0.05mol/L Tris，pH8.3。

3.3上樣

（1）樣品用平衡液配制，渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。鹽濃度太大的樣品處理后再配。

（2）一般情況是讓目標(biāo)產(chǎn)品結(jié)合在柱子上，用平衡液洗去雜質(zhì)，再選擇一種洗脫液洗下目標(biāo)產(chǎn)品。

（3）介質(zhì)對樣品組分吸附的程度取決于樣品的帶電性質(zhì)、流動相的離子強度和pH值。鹽濃度小，介質(zhì)對樣品組分吸附較牢。用 DEAE瓊脂糖層析介質(zhì)時，推薦的pH值是大于目標(biāo)產(chǎn)品等電點1個單位。

3.4洗脫

 可用增大鹽濃度或減小pH值進(jìn)行洗脫，常用增大鹽濃度的辦法洗脫。常用的洗脫液（B液）如：0.05mol/L Tris+2mol/L NaCl，pH8.3。

3.5再生

一般先用高鹽濃度的緩沖液（含1~2mol/L NaCl）洗或減小pH洗10倍以上柱體積，然后用結(jié)合蛋白時的平衡液洗到平衡即可。

若有失活蛋白質(zhì)或脂類物質(zhì)在再生時洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。

3.6在位清洗

（1）對于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白，可用0.5~1倍柱床體積的2M NaCl去除。

（2）對于沉淀蛋白、疏水性結(jié)合的蛋白或脂類，可以先用1倍柱床體積的0.1M NaOH沖洗，再用平衡緩沖溶液清洗直至pH呈中性。

（3）對強疏水性結(jié)合的蛋白、脂類等，用4~10倍柱床體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗，需注意有機(jī)溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產(chǎn)生氣泡。

3.7存儲

密封保存在4~30℃（保存溶液為20%乙醇）干燥、通風(fēng)、清潔處，不可冷凍；用過的柱子保存在4~8℃，20%乙醇溶液中。

3.8運輸

運輸中避免日曬、雨淋、重壓，嚴(yán)禁與有毒、有害物品混運。

注意事項

（1）柱的選擇：從理論上說，只要柱足夠長，就可以獲得理想的分辨率，但由于層析柱流速同壓力梯度有關(guān)，柱長增加使流速減慢，峰變寬，分辨率降低；柱的直徑增加，使液體流動的不均勻性增加，分辨率明顯下降。 

（2）純化過程必須嚴(yán)格控制洗脫緩沖液的pH及離子強度。樣品與 DEAE層析介質(zhì)必須用洗脫緩沖液徹底平衡后，才能進(jìn)行柱層析。 

（3）所裝的柱床必須表面平整，無溝流及氣泡，否則應(yīng)重裝。

（4）洗脫過程中應(yīng)嚴(yán)格控制流速，且勿過快。

（5）上樣的體積要小，濃度不宜過高。

（6）加樣及整個洗脫過程中，嚴(yán)防柱面變干。

生產(chǎn)日期：見標(biāo)簽

使用期限：在適當(dāng)?shù)馁A藏條件下可貯藏5年

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