Phenyl Seplife HP層析介質(zhì)是藍(lán)曉科技自主研發(fā)的一種新型疏水層析介質(zhì)，是將苯基偶聯(lián)到高分辨率瓊脂糖凝膠過濾層析介質(zhì)上形成的強(qiáng)疏水性層析分離介質(zhì)，它利用生物分子表面的疏水基團(tuán)與層析介質(zhì)上的疏水基團(tuán)相互作用強(qiáng)弱不同進(jìn)行分離，疏水性強(qiáng)、載量高、分辨率高，廣泛應(yīng)用于生物大分子的精細(xì)分離。

＊檢測條件：層析柱16mm×300mm；＊柱床高15cm；溫度25℃；流動(dòng)相為0.1mol/L NaCl。

使用方法

3.1 裝柱

裝柱按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程操作。必須保證每種材料都處于工作溫度，凝膠裝柱前需要脫氣。

3.2平衡

使用2~5倍柱床體積的平衡緩沖溶液平衡柱子，直至流出液的電導(dǎo)和pH同上樣緩沖液的電導(dǎo)和pH完全一致。

3.3上樣

（1）樣品用平衡液配制，渾濁的樣品要離心和過濾以后上樣。

（2）一般情況是讓目標(biāo)產(chǎn)品結(jié)合在柱子上，用平衡液洗去雜質(zhì)，再選擇一種洗脫液洗下目標(biāo)產(chǎn)物。

（3）介質(zhì)對(duì)樣品組分吸附的程度取決于樣品的疏水性質(zhì)、流動(dòng)相的離子強(qiáng)度和溫度。鹽濃度大、溫度高或樣品組分疏水性強(qiáng)，介質(zhì)對(duì)組分吸附牢。

3.4洗脫

采用降低鹽濃度使吸附的生物分子被洗脫下來。添加表面活性劑或者有機(jī)溶劑可加強(qiáng)洗脫，最常用的是低鹽濃度緩沖液，如0.02~0.05 mol/L的PBS。

3.5 再生

（1）先用蒸餾水按操作流速?zèng)_洗3～5個(gè)柱床體積，然后用平衡液清洗3～5個(gè)柱床體積。

（2）再生時(shí)若有失活蛋白質(zhì)或脂類物質(zhì)洗不掉，可用在位清洗法除去。

3.6在位清洗

（1）對(duì)于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白，可用0.5~1倍柱床體積的2M NaCl去除。

（2）對(duì)于沉淀蛋白、疏水性結(jié)合的蛋白或脂類，可以先用1倍柱床體積的0.1M NaOH沖洗，再用平衡緩沖溶液清洗直至pH呈中性。

（3）對(duì)強(qiáng)疏水性結(jié)合的蛋白、脂類等，用4~10倍柱床體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗，需注意有機(jī)溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產(chǎn)生氣泡。

3.7存儲(chǔ)

Phenyl Seplife HP密封保存在4~30℃（保存溶液為20%乙醇）干燥、通風(fēng)、清潔處，不可冷凍；用過的柱子保存在4~8℃，20%乙醇溶液中。

3.8運(yùn)輸

運(yùn)輸中避免日曬、雨淋、重壓，嚴(yán)禁與有毒、有害物品混運(yùn)。

注意事項(xiàng)

（1）典型的配基和蛋白質(zhì)結(jié)合強(qiáng)度由強(qiáng)到弱的順序是：苯基（phenyl）、辛基（octyl）、丁基（butyl）、異丙基（isopropyl）、醚（ether）。如果樣品和介質(zhì)結(jié)合緊密，可更換為弱介質(zhì)更容易洗脫下來。

（2）在疏水層析中，疏水介質(zhì)和疏水配基對(duì)選擇性影響非常大，以下因素的影響也不可忽視：樣品溶解度、純化規(guī)模、所需規(guī)模的正確配基。

（3）由于強(qiáng)疏水蛋白質(zhì)和疏水配基結(jié)合非常緊密，因此在篩選疏水介質(zhì)時(shí)，如果樣品是強(qiáng)疏水蛋白質(zhì)，可從低疏水性介質(zhì)開始，選擇在低鹽濃度下得到最高分辨率和載量的介質(zhì)。

（4）樣品與Phenyl Seplife HP必須用洗脫緩沖液徹底平衡后，才能進(jìn)行柱層析。 

（5）采用1/5層析柱的總結(jié)合載量，可在梯度洗脫時(shí)得到優(yōu)化的分離。

（6）所裝的柱床必須表面平整，無溝流及氣泡，否則應(yīng)重裝。

（7）若是大規(guī)模純化和捕獲蛋白，采用非連續(xù)（間隔式）濃度變化洗脫，可以減少分離時(shí)間和緩沖液用量。

（8）洗脫過程中應(yīng)嚴(yán)格控制流速，且勿過快。

（9）加樣及整個(gè)洗脫過程中，嚴(yán)防柱面變干。

生產(chǎn)日期：見標(biāo)簽

使用期限：在適當(dāng)?shù)馁A藏條件下可貯藏5年

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