Seplife 4FF高流速瓊脂糖層析介質(zhì)是在Seplife 4B瓊脂糖層析介質(zhì)基礎(chǔ)上經(jīng)過(guò)交聯(lián)形成的，其化學(xué)穩(wěn)定性及物理性能顯著增強(qiáng)，具有高流速、高載量、非特異性吸附低、回收率高、可多次重復(fù)使用等特點(diǎn)，可用于生物制藥和生物工程下游蛋白質(zhì)、核酸及多肽的凝膠過(guò)濾層析純化。

＊檢測(cè)條件：層析柱16mm×300mm；＊柱床高10cm；溫度25℃；流動(dòng)相為0.1mol/L NaCl。

使用方法

3.1 裝柱

裝柱按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程操作。必須保證每種材料都處于工作溫度，凝膠裝柱前需要脫氣。

3.2平衡

使用2~5倍柱床體積的上樣平衡液平衡柱子，務(wù)必使流出液的電導(dǎo)和pH同上樣緩沖液的電導(dǎo)和pH完全一致。

3.3上樣

（1）樣品用緩沖液配制，渾濁的樣品要離心和過(guò)濾后上樣。含鹽量過(guò)大、濃度過(guò)小的樣品要先做處理，再上樣。

（2）介質(zhì)對(duì)樣品組分的分離是按組分分子量大小進(jìn)行的，分子量大的先流出來(lái)。

（3）上樣體積約為柱體積的1~2%，越小分離效果越好。

3.4洗脫

用緩沖液洗脫，洗脫中保持流速、緩沖液組成不變。

3.5再生

一般用緩沖液洗到平衡，可再次使用。一些失活蛋白或者脂類在再生時(shí)洗不下來(lái)，可用在位清洗（CIP）去除。

3.6在位清洗

（1）對(duì)于以離子鍵結(jié)合的蛋白，可以用0.5~1倍柱床體積的2M NaCl去除。

（2）對(duì)于沉淀蛋白、疏水性結(jié)合的蛋白或脂類，可用1倍柱床體積的0.1M NaOH 去除。

（3）對(duì)強(qiáng)疏水性結(jié)合的蛋白、脂類等，可用4~10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清。

（4）有機(jī)溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產(chǎn)生氣泡。

清洗完畢后需用至少3倍柱床體積的平衡緩沖溶液平衡柱子，直至pH和電導(dǎo)保持不變。

3.7存儲(chǔ)

密封貯存在4~30℃（保存溶液為20%乙醇），通風(fēng)、干燥、清潔的地方，不能冷凍。用過(guò)的柱子貯存在4℃，20%乙醇溶液中。

3.8運(yùn)輸

運(yùn)輸中避免日曬、雨淋、重壓，嚴(yán)禁與有毒、有害物品混運(yùn)。

4.注意事項(xiàng)

（1）使用凝膠過(guò)濾前應(yīng)盡可能將樣品體積濃縮。

（2）樣品必須澄清沒(méi)有顆粒。

（3）為了得到最高的分辨率，上樣體積不能超過(guò)柱床體積的5%。

（4）樣品與層析介質(zhì)必須用洗脫緩沖液徹底平衡后，才能進(jìn)行柱層析。 

（5）所裝的柱床必須表面平整，無(wú)溝流及氣泡，否則應(yīng)重裝。

（6）為了保護(hù)蛋白的穩(wěn)定性和活性，需選擇一種緩沖液純化蛋白。

（7）為了避免蛋白和介質(zhì)之間非特異性的離子相互作用，緩沖液中最高可加入0.15mol/L NaCl。

（8）依據(jù)目標(biāo)蛋白的分子量，選擇介質(zhì)分離范圍中值最接近的那種介質(zhì)。

（9）洗脫過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)格控制流速，且勿過(guò)快。

（10）加樣及整個(gè)洗脫過(guò)程中，嚴(yán)防柱面變干。

（11）本品應(yīng)避免與氧化劑接觸，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露在空氣中。  

生產(chǎn)日期：見(jiàn)標(biāo)簽

使用期限：在適當(dāng)?shù)馁A藏條件下可貯藏5年

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