Butyl Seplife 4B層析介質(zhì)是藍(lán)曉科技自主研發(fā)的一種新型疏水層析介質(zhì)，它是將丁基鍵合在4%瓊脂糖凝膠上，利用疏水相互作用實(shí)現(xiàn)目標(biāo)產(chǎn)物的純化分離，是乙肝疫苗的專用疏水介質(zhì)。

＊檢測條件：層析柱16mm×300mm；＊柱床高15cm；溫度25℃；流動相為0.1mol/L NaCl。

使用方法

3.1 裝柱

裝柱按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程操作。必須保證每種材料都處于工作溫度，凝膠裝柱前需要脫氣。

3.2平衡

使用2~5倍柱床體積的平衡緩沖溶液平衡柱子，直至流出液的電導(dǎo)和pH同上樣緩沖液的電導(dǎo)和pH完全一致。平衡緩沖液一般是高鹽濃度的緩沖液，如0.02~0.05mol/L的PBS中加1~2.5mol/L（NH4）2SO4等。

3.3上樣

（1）樣品用平衡液配制，渾濁的樣品要離心和過濾以后上樣。

（2）一般情況是讓目標(biāo)產(chǎn)品結(jié)合在柱子上，用平衡液洗去雜質(zhì)，再選擇一種洗脫液洗下目標(biāo)產(chǎn)物。

（3）介質(zhì)對樣品組分吸附的程度取決于樣品的疏水性質(zhì)、流動相的離子強(qiáng)度和溫度。鹽濃度大、溫度高或樣品組分疏水性強(qiáng)，介質(zhì)對組分吸附牢。

3.4洗脫

采用降低鹽濃度使吸附的生物分子被洗脫下來。添加表面活性劑或者有機(jī)溶劑可加強(qiáng)洗脫，最常用的是低鹽濃度緩沖液，如0.02~0.05 mol/L的PBS。

3.5 再生

一般先用低鹽濃度的緩沖溶液洗10倍以上的柱床體積，然后用結(jié)合蛋白的平衡液洗到平衡即可。若有失活蛋白質(zhì)或脂類物質(zhì)洗不掉，可用在位清洗除去。

3.6在位清洗

（1）對于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白，可用0.5~1倍柱床體積的2M NaCl去除。

（2）對于沉淀蛋白、疏水性結(jié)合的蛋白或脂類，可以先用1倍柱床體積的0.1M NaOH沖洗，再用平衡緩沖溶液清洗直至pH呈中性。

（3）對強(qiáng)疏水性結(jié)合的蛋白、脂類等，用4~10倍柱床體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗，需注意有機(jī)溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產(chǎn)生氣泡。

3.7存儲

Butyl Seplife 4B密封保存在4~30℃（保存溶液為20%乙醇+0.1M醋酸鈉溶液）干燥、通風(fēng)、清潔處，不可冷凍；用過的柱子保存在4~8℃，20%乙醇溶液中。

3.8運(yùn)輸

運(yùn)輸中避免日曬、雨淋、重壓，嚴(yán)禁與有毒、有害物品混運(yùn)。

注意事項(xiàng)

（1）采用1/5層析柱的總結(jié)合載量，可在梯度洗脫時(shí)得到優(yōu)化的分離。

（2）樣品與Butyl Seplife 4B必須用洗脫緩沖液徹底平衡后，才能進(jìn)行柱層析。 

（3）在疏水層析中，疏水介質(zhì)和疏水配基對選擇性影響非常大，以下因素的影響也不可忽視：樣品溶解度、純化規(guī)模等。

（4）所裝的柱床必須表面平整，無溝流及氣泡，否則應(yīng)重裝。

（5）若是大規(guī)模純化和捕獲蛋白，采用非連續(xù)（間隔式）濃度變化洗脫，可以減少分離時(shí)間和緩沖液用量。

（6）洗脫過程中應(yīng)嚴(yán)格控制流速，且勿過快。

（7）加樣及整個洗脫過程中，嚴(yán)防柱面變干。

生產(chǎn)日期：見標(biāo)簽

使用期限：在適當(dāng)?shù)馁A藏條件下可貯藏5年

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