a.蛋白和介質(zhì)結(jié)合力過(guò)強(qiáng):增加洗脫強(qiáng)度，比如his蛋白和鎳柱結(jié)合，可以增加取代基咪唑的濃度。
b.蛋白聚集在層析柱上:通過(guò)調(diào)整層析過(guò)程的緩沖液增加蛋白的穩(wěn)定性，改善蛋白在層析柱上的狀態(tài)。聚集在層析柱上時(shí)就要對(duì)層析柱進(jìn)行CIP清洗。
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