Seplife? LXPM SP400M層析介質是以聚甲基丙烯酸甲酯為基質，在表面進行了親水性改性再鍵合了強酸性離子交換基團，具有親水性好、孔道均一、機械強度高、反壓低等特點。與傳統層析填料相比，表現出更優異的分離性能，顯著的提高了下游純化工藝的生產效率。除此之外，Seplife? LXPM SP400M層析介質可替代昂貴的瓊脂糖離子交換樹脂進行蛋白聚集體的初級純化，降低成本，創造出較好的經濟效益，廣泛應用于生物大分子（蛋白，抗源等）的純化和分離。

使用方法

3.1 裝柱

勻漿濃度等于靜置膠體積除以除以勻漿后的總體積。采用0.5M NaCl勻漿可獲得最佳裝柱效果，其濃度為65%-70%。方法如下：

1)色譜柱的柱體積 V，V=Ac×L，Ac=π×r2。

Ac：色譜柱橫截面積；L:色譜柱高度；r：色譜柱半徑。

2) 攪動介質形成勻漿液，量取所需質量或體積。其為柱體積的1.2倍左右，防止收縮。

3）用 0.5 M NaCl 溶液置換20%乙醇，平衡過夜。

4）裝柱之前，用 0.5 M NaCl 溶液調整勻漿濃度為 50 ~ 70%；將勻漿一次性倒入層析柱，沉降平衡后標注高度。

5）將分配器裝入，調節高度使得壓縮系數為 1.05 ~ 1.10；然后啟動輸液泵，用 1.5~2 倍工作流速使柱床穩定（2 - 5柱體積）。

6）按照 SOP 進行柱效和對稱性的測定，須達到預定標準。 

3.2 柱效評價 

裝好之后，色譜柱用2 - 5 CV 0.5 M NaCl 溶液平衡，再用 2.0 M NaCl 以 100 cm/h 流速進行柱效測試，具體測試參數詳見下表： 

離子交換層析柱的柱效測試方法

樣品：      2 M NaCl 溶液 

上樣量：    0.5-1 % 柱體積 

洗脫液：    0.5 M NaCl 溶液 

線性流速：  100 cm/h 

檢測：      UV @ 280 nm，電導檢測儀

3.3 清洗 

裝好的色譜柱應使用至少使用5 CV的去離子水清洗。 

3.4 平衡 

使用適當的5CV倍柱體積緩沖液進行柱子的平衡，至流出液電導和PH不變（與平衡液一致），緩沖液 如 Buffer A，如 20 mM PBS, pH7.0，具體的緩沖體系應根據目標蛋白的穩定性和等電點、離子交換介質的種類進行篩選和優化。 

3.5上樣 

固體樣品可用平衡液溶解配制；低濃度樣品溶液可用平衡液透析；高濃度樣品溶液可用平衡液稀釋。為了避免堵塞層析柱，樣品應經離心或膜過濾處理。進料量根據介質的載量和料液中目標蛋白的含量計算，上樣前確保樣品緩沖液應盡可能與平衡液一致。 

3.6洗脫 

上樣完畢后繼續用平衡緩沖液淋洗至基線穩定，可以根據實際情況采取提高鹽濃度或改變流動相 pH 的方法依次洗脫吸附于層析介質上的樣品。 

3.7再生 

每次層析之后可用0.5-2 M NaCl 清洗層析柱，除去強結合于層析介質上的蛋白。 

3.8 在位清洗 

為了保持層析柱的性能，若有蛋白質或其他雜質在再生過程中未能有效去除，可執行在位清洗步驟，在位清洗時，也可采用反向沖洗的方法，具體操作步驟如下： 

（1）對于通過離子鍵結合過強的蛋白，可用3CV以上的2M NaCl 清洗，并用3CV以上的去離子水清洗； 

（2）對沉淀蛋白、以疏水性結合的蛋白或脂蛋白，可用0.2~0.5 M NaOH 清洗（與層析介質接觸時間 1~2 h），并用5CV以上平衡液和3CV以上的去離子水清洗； 

（3）對強疏水性結合的蛋白、脂蛋白和脂類物質，可用5CV以上的50%乙醇或 30%異丙醇清洗（與層析介質接觸時間0.5-1 h），并用5 CV以上的去離子水清洗。也可用含非離子表面活性劑的堿性或酸性溶液清洗，如0.1~0.5%的 Triton X-100 + 0.1 M乙酸清洗 1-2 h，并用5CV以上的50%乙醇沖洗去除去污劑，然后用5CV以上的純水沖洗（使用高濃度的有機溶劑時，為了避免產生氣泡，應采用逐步增加有機溶劑濃度的方法）。 

4.存儲

暫時不使用的層析介質需保存在 4～30℃ 的 20%乙醇中，已經裝好的層析柱應保存在含 20%乙醇的緩沖液(pH 7.0)；使用前請裝柱后將乙醇清洗干凈。

5.運輸

運輸中避免日曬、雨淋、重壓，嚴禁與有毒、有害物品混運。

生產日期：見標簽

使用期限：在適當的貯藏條件下可貯藏5年

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