Plasmid Seplife LX親和層析介質(zhì)是藍(lán)曉科技自主研發(fā)的一種新型高度交聯(lián)的親硫芳香族瓊脂糖層析介質(zhì)，用于純化超螺旋DNA，廣泛應(yīng)用于基因治療和DNA疫苗的開(kāi)發(fā)應(yīng)用。該層析介質(zhì)具有高流速、低反壓、非特異性吸附低、良好的親水性、化學(xué)穩(wěn)定性和機(jī)械性特點(diǎn)，方便進(jìn)行規(guī)模放大，可縮短生產(chǎn)時(shí)間，提高生產(chǎn)效率。

使用方法

3.1 裝柱

裝柱按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程操作。必須保證每種材料都處于工作溫度，凝膠裝柱前需要脫氣。

3.2平衡

使用2~5倍柱床體積的上樣平衡液平衡柱子，務(wù)必使流出液的電導(dǎo)和pH同上樣緩沖液的電導(dǎo)和pH完全一致。平衡液是含高濃度硫酸銨的Tris緩沖溶液，推薦緩沖液：2 M（NH4）2SO4，10mM EDTA，100mM Tris-HCl，pH 7.5 。

3.3上樣

（1）樣品用平衡液配制，渾濁的樣品要離心和過(guò)濾后上樣。

（2）一般情況是讓目標(biāo)產(chǎn)品結(jié)合在柱子上，用平衡液洗去雜質(zhì)，再選擇一種洗脫液洗下目標(biāo)產(chǎn)品。

3.4洗脫

常用低濃度的硫酸銨溶液（1.7M）加0.3M氯化鈉溶液洗脫。

推薦洗脫液：100mM Tris-HCl，1.7 M （NH4）2SO4，10 mM EDTA, pH 7.5 + 0.3 M NaCl。

3.5再生

 一般可用100 mM Tris, 10 mM EDTA洗脫5倍以上柱體積，然后用結(jié)合蛋白時(shí)的平衡液洗到平衡即可。

3.6在位清洗

（1）對(duì)于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白，可用0.5~1倍柱床體積的2M NaCl去除。

（2）對(duì)于沉淀蛋白、疏水性結(jié)合的蛋白或脂類，一般先用1mol/L NaOH洗脫5倍以上柱體積，然后用結(jié)合蛋白時(shí)的平衡液洗到平衡即可。

（3）對(duì)強(qiáng)疏水性結(jié)合的蛋白、脂類等，用4~10倍柱床體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗，需注意有機(jī)溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產(chǎn)生氣泡。

3.7存儲(chǔ)

密封保存在4~30℃（保存溶液為20%乙醇）干燥、通風(fēng)、清潔處，不可冷凍；用過(guò)的柱子保存在4~8℃，20%乙醇溶液中。

3.8運(yùn)輸

運(yùn)輸中避免日曬、雨淋、重壓，嚴(yán)禁與有毒、有害物品混運(yùn)。

注意事項(xiàng)

（1）柱的選擇：從理論上說(shuō)，只要柱足夠長(zhǎng)，就可以獲得理想的分辨率，但由于層析柱流速同壓力梯度有關(guān)，柱長(zhǎng)增加使流速減慢，峰變寬，分辨率降低；柱的直徑增加，使液體流動(dòng)的不均勻性增加，分辨率明顯下降。 

（2）純化過(guò)程樣品與層析介質(zhì)必須用洗脫緩沖液徹底平衡后，才能進(jìn)行柱層析。 

（3）所裝的柱床必須表面平整，無(wú)溝流及氣泡，否則應(yīng)重裝。

（4）洗脫過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)格控制流速，且勿過(guò)快。

（5）加樣及整個(gè)洗脫過(guò)程中，嚴(yán)防柱面變干。

生產(chǎn)日期：見(jiàn)標(biāo)簽

使用期限：在適當(dāng)?shù)馁A藏條件下可貯藏5年

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