Seplife? LXPM-Ni5504 IDA C層析介質是以聚丙烯酸酯為基質，在表面進行了親水性改性再偶聯螯合基團制成，具有親水性好、高載量、分辨率高、非特性吸附小，物理化學穩定等特點。Seplife? LXPM-Ni5504 IDA廣泛應用于分離純化能被金屬離子吸附的多肽、蛋白、核苷酸、磷酸化蛋白及帶His 標簽的重組蛋白。
性能介紹
骨架 | 聚甲基丙烯酸甲酯 |
外觀 | 淡藍色不透明球狀顆粒 |
功能基團 | Ni2+ |
D50v粒度（μm） | 200 |
孔徑（?） | 1000 |
載量（mg/ml介質） | ≧18mg His蛋白 |
離子結合量（Ni2+ umol/ml） | ~55 |
耐壓流速(cm/h） | 800-1000 22mm×20cm,3bar 壓縮因子≦1.05 |
最大耐壓（MPa） | 0.5 |
pH穩定范圍 | 2-13 |
存儲，防腐劑 | 20%乙醇溶液，150mol/l NaCl |
穩定性 | 在常用水相溶液中穩定：0.1M氫氧化鈉；8M尿素(24h)；6M鹽酸胍(24h)，1M NaOH(24h)，5mM DTT(24h) |
使用方法
3.1 裝柱
勻漿濃度等于靜置膠體積除以除以勻漿后的總體積。采用0.5M NaCl勻漿可獲得最佳裝柱效果，其濃度為60%-70%。方法如下：
1)色譜柱的柱體積 V，V=Ac×L，Ac=π×r2。
Ac：色譜柱橫截面積；L:色譜柱高度；r：色譜柱半徑。
2) 攪動介質形成勻漿液，量取所需質量或體積。其為柱體積的1.2倍左右，防止收縮。
3）用 0.5 M NaCl 溶液置換20%乙醇，平衡過夜。
4）裝柱之前，用 0.5 M NaCl 溶液調整勻漿濃度為 65 ~ 70%；將勻漿一次性倒入層析柱，沉降平衡后標注高度。
5）將分配器裝入，調節高度使得壓縮系數為 1.05 ~ 1.10；然后啟動輸液泵，用 1.5~2 倍工作流速使柱床穩定。
6）按照 SOP 進行柱效和對稱性的測定，須達到預定標準。
3.2 柱效評價
裝好之后，色譜柱用3-5體積超純水清洗。100cm/h流速平衡并進行柱效測試。
離子交換層析柱的柱效測試方法
樣品： 2 M NaCl 溶液
上樣量： 1~5 % 柱體積
洗脫液： 0.5 M NaCl 溶液
線性流速： 100 cm/h
檢測： UV @ 280 nm，2 M NaCl 上樣：電導檢測儀
3.3 清洗
裝好的色譜柱應使用至少使用5BV的去離子水清洗。
3.4 平衡
使用適當的5-10倍柱體積緩沖液進行柱子的平衡，至流出液電導和PH不變（與平衡液一致），具體的緩沖體系應根據目標蛋白特性及穩定性進行篩選和優化。
3.5上樣
固體樣品可用平衡液溶解配制；低濃度樣品溶液可用平衡液透析；高濃度樣品溶液可用平衡液稀釋。為了避免堵塞層析柱，樣品應經離心或膜過濾處理。進料量根據介質的載量和料液中目標蛋白的含量計算，上樣前確保樣品緩沖液應盡可能與平衡液一致。此外，還需注意以下事項：
（1）樣品一般溶解于pH6～8的初始緩沖液中，提高上樣緩沖液的pH值可以增大載量。
（2）緩沖液中不能含有EDTA和檸檬酸鹽，同時最好避免巰基乙醇、DTT等還原劑。
（3）常用緩沖液有10～100mmol/L磷酸鈉緩沖液、20～200mmol/L Tris-HCl緩沖液等。
（4）緩沖液中一般要加入0.15～0.5mol/L的NaCl以消除離子交換作用。
3.6洗脫
上樣完畢后繼續用平衡緩沖液淋洗至基線穩定，可以根據實際情況采取以下幾種方法洗脫吸附于層析介質上的樣品：
（1）降低pH洗脫：大多數蛋白在pH 4~6會被洗脫下來（也可以在pH 3~4），緩沖液可以是醋酸鈉、檸檬酸和磷酸鹽緩沖體系。
（2）競爭性洗脫：線性增加或一步增加同金屬離子有親和力的競爭物質的濃度（如0~0.5mol/L咪唑、0~50 mmol/L組氨酸、0~2mol/L NH4Cl）。
（3）螯合劑洗脫：EDTA、EGTA 等螯合劑可同金屬離子產生作用力會使蛋白被洗脫下來。但是此法不能分離不同的蛋白，會影響蛋白的吸附，導致融合蛋白無法掛柱。
備注：（1）初次使用時，如不確定洗脫需要的咪唑濃度，推薦在初始緩沖液中分別加入10mmol/L、20mmol/L、50mmol/L、100mmol/L、200mmol/L、500mmol/L咪唑，濃度從低到高分別洗脫和收集重組蛋白，之后通過SDS-PAGE電泳等方法鑒定洗脫結果。
（2）咪唑為堿性，相應緩沖液配制后需要用HCl調節pH值。
（3）降低pH洗脫和螯合劑洗脫會使金屬離子脫落，下次使用前需重新螯和金屬離子。
（4）有條件的可以進行咪唑梯度線性洗脫以確定較佳的洗脫條件。
上述洗脫方法，均須在緩沖液中加入150~500mmol/L的NaCl以消除離子交換作用。
3.7再生
（1）多次使用后或需要更換螯合的金屬離子時，必須將凝膠脫鎳再生。脫鎳方法：首先用5~10個柱床體積的蒸餾水淋洗柱子，然后用5~10個柱床體積的100mmol/L EDTA淋洗柱子，最后用2~3個柱床體積的0.5mol/L NaCl洗掉殘留的EDTA。
（2）多次使用的柱子脫鎳后一般需要清洗。清洗方法：用0.1~1.0 mol/L NaOH反向清洗柱子，50 cm/h保持1~2 h，不僅可以去除結合強的雜質，也可以去除熱源。
（3）清洗后需要重新螯合金屬離子。螯合方法：首先用2~5個柱床體積的蒸餾水充分平衡脫鎳后的柱子，然后用0.1~0.3mol/L金屬鹽溶液過柱5~10個柱床體積以螯合金屬離子，最后用5~10個柱床體積的蒸餾水淋洗以去除未螯合的金屬離子。
3.8 在位清洗
為了保持層析柱的性能，若有蛋白質或其他雜質在再生過程中未能有效去除，可執行在位清洗步驟，具體操作步驟如下：
（1）去除因離子交換作用吸附的蛋白：用2mol/L NaCl溶液反向清洗2~3個柱床體積。
（2）去除強疏水性蛋白和脂質等：用70%乙醇或者30%異丙醇反向清洗4個柱床體積。
（3）除去沉淀蛋白、疏水性蛋白：參照凝膠再生步驟。
4.存儲
暫時不使用的層析介質需保存在 4~30 ℃ 的 20%乙醇中，已經裝好的層析柱應保存在含 20%乙醇的緩沖液(pH 7.0)；使用前請裝柱后將乙醇清洗干凈。
5.運輸
運輸中避免日曬、雨淋、重壓，嚴禁與有毒、有害物品混運。
產品牌號 | 貨號 | 包裝規格 |
Seplife? LXPM-Ni5504 IDA C | PM521024C1-1 | 25ml |
PM521024C1-2 | 100ml | |
PM521024C1-3 | 500ml | |
PM521024C1-4 | 1L | |
PM521024C1-5 | 5L | |
PM521024C1-6 | 10L |
生產日期：見標簽
使用期限：在適當的貯藏條件下可貯藏5年
注冊人名稱/生產企業：西安藍曉科技新材料股份有限公司
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