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殼層技術(shù)多模式層析介質(zhì)應(yīng)用手冊(cè)

2022-05-31 14:22:30

殼層技術(shù)多模式層析介質(zhì)簡(jiǎn)介

殼層技術(shù)多模式層析介質(zhì),是藍(lán)曉科技自主研發(fā)的一種新型多模式瓊脂糖層析介質(zhì),用于病毒等生物大分子的中度純化和精細(xì)純化。該層析介質(zhì)運(yùn)用新型殼層微球技術(shù)及辛胺配基,具有凝膠過(guò)濾和吸附分離雙重功能。核心功能區(qū)鍵合強(qiáng)吸附配體辛胺,以靜電力及疏水作用力在寬泛的pH和離子強(qiáng)度下結(jié)合分子,同時(shí)核心功能區(qū)外層有約5um的殼層,殼層上有700 KDa / 400 KDa的空隙和核心功能區(qū)連通。新型殼層微球技術(shù)可有效捕獲污染物,同時(shí)使目標(biāo)分子流穿。Seplife Suncore 700 / 400層析介質(zhì)具有高流速、低反壓、高處理量、良好的化學(xué)穩(wěn)定性和機(jī)械性等特點(diǎn),方便進(jìn)行規(guī)模放大,可縮短生產(chǎn)時(shí)間,提高生產(chǎn)效率。澄清的溶液流經(jīng)柱床時(shí),大于700 KDa / 400 KDa的生物分子被排阻在殼層外面,通過(guò)外水體積流穿,而小于700 KDa / 400 KDa的生物分子通過(guò)殼層的空隙進(jìn)入核心功能區(qū),并結(jié)合在核心中,從而在較高流速及較大上樣量的狀態(tài),依然能超大生物分子和其它生物分子的分離。

圖:殼層技術(shù)多模式層析介質(zhì)結(jié)構(gòu)示意圖(藍(lán)曉科技)

殼層技術(shù)多模式層析介質(zhì)性能參數(shù)

殼層技術(shù)多模式層析介質(zhì)的使用方法

1 裝柱

裝柱按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程操作。必須保證每種材料都處于工作溫度,凝膠裝柱前需要脫氣。

2 平衡

使用2~5倍柱床體積的上樣平衡液平衡柱子,務(wù)必使流出液的電導(dǎo)和pH同上樣緩沖液的電導(dǎo)和pH完全一致。平衡液可以是常規(guī)凝膠過(guò)濾和離子交換層析介質(zhì)使用的緩沖體系,如磷酸鹽緩沖液,Tris緩沖液;不建議使用醋酸緩沖體系,這樣會(huì)降低層析介質(zhì)的結(jié)合載量。

3 上樣

一般情況是目標(biāo)分子走流穿模式,雜質(zhì)吸附在內(nèi)部孔道。

實(shí)際上樣量可以達(dá)到5-20柱體積,主要取決于樣品的組成。

4 淋洗和再生

用平衡緩沖液淋洗柱子,結(jié)合的雜質(zhì)可用在位清洗(CIP)除去。

5 在位清洗

為了去除捕獲的污染物,維持產(chǎn)品的性能,需要定期進(jìn)行在位清洗。建議在每個(gè)周期后使用含1.0 M NaOH的30%異丙醇溶液沖洗或者用27%的丙酮溶液反相沖洗,接觸時(shí)間30-60min,中間可以在溶液中暫存15-30min,提高清洗效率。

NaOH的濃度、有機(jī)溶劑的種類、接觸時(shí)間及在位清洗的體積都可以根據(jù)實(shí)際樣品進(jìn)行優(yōu)化。

6 消毒

可以使用0.5-1.0M NaOH溶液過(guò)柱,接觸時(shí)間1h,對(duì)使用過(guò)的層析柱進(jìn)行消毒。

7 存儲(chǔ)

密封保存在4~30℃(保存溶液為20%乙醇)干燥、通風(fēng)、清潔處,不可冷凍;用過(guò)的柱子保存在4~8℃,20%乙醇溶液中。

8 運(yùn)輸

運(yùn)輸中避免日曬、雨淋、重壓,嚴(yán)禁與有毒、有害物品混運(yùn)。

Seplife Suncore  400應(yīng)用

用進(jìn)口CORE 400和藍(lán)曉Seplife Suncore 400同時(shí)平行純化手足口EV71病毒原液。

純化結(jié)果:藍(lán)曉科技Seplife Suncore 400和進(jìn)口CORE 400在流穿,洗脫峰高及峰面積上均無(wú)明顯差異,更多信息請(qǐng)聯(lián)系藍(lán)曉科技。

Seplife Suncore  700應(yīng)用


用進(jìn)口CORE 700和藍(lán)曉Seplife Suncore 700同時(shí)平行純化澄清的流感病毒原液。

殼層技術(shù)多模式層析介質(zhì)的應(yīng)用范圍

1. 病毒類生物制品的流穿模式純化

用于制備滅活疫苗及弱毒活疫苗的病毒均可用殼層技術(shù)多模式層析介質(zhì)進(jìn)行純化,如狂犬病毒,流感病毒,手足口病毒等。病毒粒子>700 KDa (約30nm)時(shí)可選用Seplife Suncore 700 及Seplife Suncore 400,病毒粒子>400 KDa 選用Seplife Suncore 400。

2. 類病毒顆粒(VLPs)流穿模式

VLP疫苗也是當(dāng)前疫苗制備的重要技術(shù)之一,如國(guó)內(nèi)生產(chǎn)的乙肝疫苗全部采用VLP技術(shù)路線,如VLP乙肝疫苗的顆粒在22nm左右,可采用Seplife Suncore 400流穿模式純化。

3. 病毒載體的流穿模式純化

用于制備載體疫苗的病毒載體如腺病毒載體及減毒流感病毒載體均可用Seplife Suncore 700中度及精細(xì)純化。同時(shí)用于細(xì)胞治療及基因治療的病毒載體如慢病毒(LV),逆轉(zhuǎn)錄病毒(RV)可以用Seplife Suncore 700進(jìn)行純化,腺相關(guān)病毒(AAV)可以用Seplife Suncore 400進(jìn)行純化。

4.pDNA的流穿模式純化

用于制備核酸藥物的pDNA可以用Seplife Suncore 700流穿模式純化,pDNA經(jīng)外水體積流穿,而RNA及HCP,內(nèi)毒素等則通過(guò)殼層的空隙進(jìn)入核心區(qū)域,結(jié)合在層析介質(zhì)中,從而實(shí)現(xiàn)分離純化。

5. 外泌體的流穿模式純化

細(xì)胞分泌的外泌體通常在30-150nm的范圍,澄清的細(xì)胞培養(yǎng)液經(jīng)過(guò)殼層技術(shù)多模式層析介質(zhì)Seplife Suncore 700時(shí),外泌體被排阻在殼層外流穿,而HCP,HCD等雜質(zhì)則通過(guò)殼層的空隙進(jìn)入核心區(qū)結(jié)合在層析介質(zhì)上,從而實(shí)現(xiàn)分離純化。

6. 納米載體的流穿模式純化

隨著技術(shù)的發(fā)展,納米載體也被廣泛用于基因治療載體及新型疫苗的開發(fā),納米載體因顆粒比較大,也可以用Seplife Suncore 400/700進(jìn)行流穿模式純化。

殼層技術(shù)多模式層析介質(zhì)的應(yīng)用行業(yè)

1. 人用疫苗

主要用于病毒類疫苗,滅活疫苗制備時(shí)滅活病毒的流穿模式純化,弱毒活疫苗制備時(shí)活病毒的純化;核酸疫苗制備pDNA時(shí),pDNA的流穿模式純化;載體疫苗制備時(shí)病毒載體及納米載體的流穿模式純化;VLP疫苗制備時(shí)VLP的純化。人用疫苗制備時(shí),一步殼層技術(shù)多模式層析通常難以滿足產(chǎn)品純度要求,故在人用疫苗制備時(shí),殼層技術(shù)多模式層析通常要聯(lián)合離子交換層析如Q Large Scale,或聯(lián)合凝膠過(guò)濾層析Seplife 4FF完成整個(gè)純化過(guò)程。

2. 動(dòng)物疫苗

和人用疫苗類似,不同的是,動(dòng)物疫苗通常一步殼層技術(shù)多模式層析純化后,即可滿足產(chǎn)品純度要求。

3.細(xì)胞及基因治療

 細(xì)胞及基因治療,病毒類載體,從開始的pDNA制備,pDNA的純化到病毒載體的純化都可以用殼層技術(shù)多模式層析進(jìn)行中度及精細(xì)純化。同時(shí)在基因治療行業(yè)非病毒載體中的納米載體也可用殼層技術(shù)多模式層析進(jìn)行分離純化。

4. 其它行業(yè)

 如IVD行業(yè)制備外泌體時(shí),外泌體可以用殼層技術(shù)多模式層析進(jìn)行分離純化。

殼層技術(shù)多模式層析介質(zhì)應(yīng)用常見問題

殼層技術(shù)多模式純化病毒時(shí)回收率低

因?yàn)椴《拘螤罴敖Y(jié)構(gòu)影響,若用Seplife Suncore 700純化時(shí)回收率低,可嘗試用Seplife Suncore 400代替以提高回收率。

上樣量小

上樣量與原液中HCP等雜質(zhì)含量有關(guān),原液中雜質(zhì)含量越高上樣量越小,可以在上樣通過(guò)UF/DF的方式去除小分子雜質(zhì),在進(jìn)行殼層技術(shù)多模式層析。如用含有牛血清的培養(yǎng)基里面含量大量BSA,可在進(jìn)行殼層技術(shù)多模式前用UF/DF去除大部分的BSA。

使用壽命短

使用壽命主要是由樣品的澄清度決定,在進(jìn)行層析時(shí)要充分澄清并用核酸酶處理,降低粘度,避免微小固體顆粒進(jìn)入殼層的空隙影響其壽命

更多關(guān)于殼層技術(shù)多模式層析介質(zhì)使用的問題請(qǐng)聯(lián)系藍(lán)曉科技:

0512-65160522

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