河北層析介質(zhì)聯(lián)系電話地址
發(fā)布時(shí)間：2022-07-19 01:58:30
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His-Tag融合蛋白純化常見問題：1.His標(biāo)簽蛋白不和介質(zhì)結(jié)合。a可能原因：超聲功率不合適（太大，蛋白碳化，太小，蛋白沒完全釋放)。解決方法：改變超聲功率或者其它方法破碎細(xì)胞。b.樣品或緩沖液不合適。解決方法：確保緩沖液中螯合劑，還原劑，咪唑濃度不是很高。c.His標(biāo)簽暴露不完全。解決方法：在緩沖液中加變性劑（4-8M尿素，4-6M鹽酸胍），然后用IMAC介質(zhì)純化。d.His標(biāo)簽丟失。
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金屬螯合親和層析介質(zhì)：組氨酸（His）的殘基上帶有一個(gè)咪唑基團(tuán)，可以和Ni2+,Co2+等過渡金屬離子形成配位鍵而選擇性的結(jié)合在金屬離子上，這些金屬離子能夠用螯合配體固定在層析介質(zhì)上，因此帶有組氨酸標(biāo)簽的蛋白在經(jīng)過裝配了金屬離子的層析介質(zhì)時(shí)可以選擇性的結(jié)合在介質(zhì)上，而其他的雜質(zhì)蛋白則不能結(jié)合或者僅能微弱結(jié)合。結(jié)合在介質(zhì)上的HIS標(biāo)簽蛋白可以通過提高緩沖液中的咪唑濃度進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)性洗脫，從而得到較高純度的HIS標(biāo)簽蛋白。
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洗脫峰雜質(zhì)多，可能原因：非特異性結(jié)合，清洗不徹底，降解等。解決方法：蛋白純化過程加蛋白抑制劑防止降解，上樣完后要徹底清洗，加一定的NaCl和咪唑減少非特異性結(jié)合。使用幾次后，介質(zhì)結(jié)合效率降低，柱效降低。可能原因：介質(zhì)上沉積大量雜質(zhì)等。解決方法：徹底清洗，IDA/IMAC脫鎳再生處理。
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層析填料被污染或老化：隨著填料的使用，一些雜質(zhì)的積累會(huì)使層析填料的孔徑發(fā)生變化（如堵塞，非特異性吸附積累，微生物污染，破碎等），導(dǎo)致其排阻能力發(fā)生偏差而影響分離度。此時(shí)可對(duì)填料進(jìn)行CIP清洗，若清洗后還不能達(dá)到分離要求，就要更換新的填料。
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親和層析介質(zhì)的特點(diǎn)：1、基于配體和分離物間的特異性親和作用，分離選擇性強(qiáng)，效果好，純化倍數(shù)高。2、能完成一步方法很難完成的分離，如變性和非變性的，功能不同的蛋白。3、通常一步純化就可達(dá)到>90%的純度。4、速度快，操作簡單。
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由細(xì)胞的貼壁、生長狀態(tài)、細(xì)胞密度及消化后重新貼壁情況觀察可以得出，Vero細(xì)胞在藍(lán)曉科技微載體Seplife LX-MC-Dex1上能夠生長，胰酶消化后細(xì)胞分散情況符合標(biāo)準(zhǔn)，是病毒類生物制品制備之利器。層析介質(zhì)國產(chǎn)化替代，藍(lán)曉科技有多糖微球介質(zhì)，大孔聚合物微球介質(zhì)，多模式介質(zhì)等，全力助力生物制品下游工藝過程中層析介質(zhì)的國產(chǎn)化替代。