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山西蛋白純化聯系電話地址

發布時間:2023-08-25 01:45:14
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DEAE-52和DEAE-FF有什么區別:兩者都是弱陰離子填料。DEAE-52是纖維素基質,平均粒徑50um,DEAE-FF是瓊脂糖基質,中心粒徑90um。同樣的上樣流速前者反壓明顯大于后者,無法滿足工業化生產需求,現在市面上很少有提供DEAE-52的,工業化生產都在用DEAE-FF或者更高剛性的,兩者選擇的話,強烈推薦使用DEAE-FF。

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Seplife?IEX離子交換層析填料是采用獨有的聚合物合成技術制備出以聚甲基丙烯酸酯為骨架的微球。該聚合物微球經過表面親水性改造以增加親水性,再通過化學合成的方法鍵合不同的離子交換基團。由于其良好的親水性和較好的物理、化學穩定性及剛性結構,使得離子交換層析填料具有良好的生物相溶性及使用壽命,并提高純化效率。

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建立蛋白質純化工藝時,最重要的是需要考慮純化得到的蛋白質應能滿足其后續應用要求。蛋白質的含量及純度都必須滿足應用要求。而且,因為后續應用需要的是保持良好折疊結構的活性蛋白質,因此蛋白質活性的相關信息也需要考慮。在純化及后續的保存過程中,很多處理方法都會對蛋白質的性質產生影響,如蛋白質的去折疊、聚集、降解和失活等。制定詳細計劃,在最短時間內完成蛋白質純化,并在最穩定的條件下進行保存才算是成功地完成了其整個純化過程。

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His-Tag純化時金屬螯合介質的選擇:1、科研微量制備——Ni Seplife HP(IDA),此層析填料分辨率高,科研微量制備可用此填料純化,純度更高。2、樣品中含有DTT或EDTA——Ni Seplife FF(TED),此填料可以耐受100mM的EDTA及10mM的DTT,樣品中含有EDTA及DTT時無需換液直接過鎳柱純化。3、樣品中含有8M尿素(6M鹽酸胍)——Ni Seplife FF(NTA),IDA耐受性差,TED結合力弱,在含有高濃度尿素時結合效率差,所以含有變性劑的樣品首選IMAC的鎳柱。

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層析介質壽命驗證的原則:壽命驗證實驗設計必須能夠完全反映商業化生產規模的性能。壽命驗證實驗必要體現商業化生產規模之間的相關性。a.在設計小試驗證實驗時需保證層析過程放大因素和中試及生產規模保持一致的因素完全一致,可根據層析過程中的可線性方大因素設計試驗規模及層析柱和層析系統的選型。b.避免層析過程影響因素對結果的影響。設計小試實驗室必須在生產所要求的環境溫度及潔凈車間進行,并且嚴格執行過程SOP,且要對過程進行可靠的監管。

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層析填料被污染或老化:隨著填料的使用,一些雜質的積累會使層析填料的孔徑發生變化(如堵塞,非特異性吸附積累,微生物污染,破碎等),導致其排阻能力發生偏差而影響分離度。此時可對填料進行CIP清洗,若清洗后還不能達到分離要求,就要更換新的填料。

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