海南蛋白純化產地貨源公司
發布時間：2023-08-18 01:45:21
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生物分子與親和層析介質上的配體通過共價鍵、范德華力、疏水力、靜電力等作用發生生物學專一性結合形成復合物，共價鏈接在載體表面的功能團配體上。蛋白質親和層析技術通過目標蛋白質與配體間通過特異性親和力吸附而達到分離純化的目的，具有生物專一性的特點，純化效率高。親和層析是一種根據生物分子之間的特異相互作用來分離蛋白的層析方法，如酶和底物、受體和配體、抗體和抗原。這種作用是特異性的也是可逆的，通過這種可逆的結合和分離來達到蛋白純化的目的。
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建立蛋白質純化工藝時，最重要的是需要考慮純化得到的蛋白質應能滿足其后續應用要求。蛋白質的含量及純度都必須滿足應用要求。而且，因為后續應用需要的是保持良好折疊結構的活性蛋白質，因此蛋白質活性的相關信息也需要考慮。在純化及后續的保存過程中，很多處理方法都會對蛋白質的性質產生影響，如蛋白質的去折疊、聚集、降解和失活等。制定詳細計劃，在最短時間內完成蛋白質純化，并在最穩定的條件下進行保存才算是成功地完成了其整個純化過程。
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His-Tag融合蛋白純化常見問題：1.His標簽蛋白不和介質結合。a可能原因：超聲功率不合適（太大，蛋白碳化，太小，蛋白沒完全釋放)。解決方法：改變超聲功率或者其它方法破碎細胞。b.樣品或緩沖液不合適。解決方法：確保緩沖液中螯合劑，還原劑，咪唑濃度不是很高。c.His標簽暴露不完全。解決方法：在緩沖液中加變性劑（4-8M尿素，4-6M鹽酸胍），然后用IMAC介質純化。d.His標簽丟失。
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His-Tag融合蛋白是目前最常見的蛋白表達方式，而且很成熟，它的優點是表達方便且不影響蛋白的活性，無論是可溶性表達或者包涵體都可以用固定金屬離子親和層析（IMAC）純化。IMAC是Porathetal.1975年用固定IDA作為配基的介質螯合過渡金屬銅、鎳、鈷或鋅離子，可以吸附純化表面帶組氨酸、色氨酸或半胱氨酸殘基的蛋白。