青海層析介質(zhì)生產(chǎn)廠家
發(fā)布時(shí)間：2023-08-13 01:45:41
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親和層析是一種根據(jù)生物分子之間的特異相互作用來(lái)分離蛋白的層析方法，如酶和底物、受體和配體、抗體和抗原。這種作用是特異性的也是可逆的，通過(guò)這種可逆的結(jié)合和分離來(lái)達(dá)到蛋白純化的目的。產(chǎn)品特點(diǎn)：1、基于配體和分離物間的特異性親和作用，分離選擇性強(qiáng)，效果好，純化倍數(shù)高。2、能完成一步方法很難完成的分離，如變性和非變性的，功能不同的蛋白。3、通常一步純化就可達(dá)到>90%的純度 速度快，操作簡(jiǎn)單。
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Seplife?IEX離子交換層析填料是采用獨(dú)有的聚合物合成技術(shù)制備出以聚甲基丙烯酸酯為骨架的微球。該聚合物微球經(jīng)過(guò)表面親水性改造以增加親水性，再通過(guò)化學(xué)合成的方法鍵合不同的離子交換基團(tuán)。由于其良好的親水性和較好的物理、化學(xué)穩(wěn)定性及剛性結(jié)構(gòu)，使得離子交換層析填料具有良好的生物相溶性及使用壽命，并提高純化效率。
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溶菌緩沖液和純化工藝的前期步驟中常常會(huì)添加蛋白酶抑制劑以防止目標(biāo)蛋白質(zhì)被內(nèi)源性蛋白酶酶解。而純化工藝的后期一般不用再添加這些蛋白酶抑制劑，因?yàn)榇藭r(shí)幾乎所有的蛋白酶都已經(jīng)從目標(biāo)蛋白質(zhì)分離出去。蛋白質(zhì)的保存緩沖液中通常要添加金屬螯合劑，如EDTA或EGTA。這些金屬螯合劑與 Mg2+結(jié)合以防止目標(biāo)蛋白質(zhì)被所含的金屬蛋白酶分解。還有一些其他的添加劑，主要是用來(lái)保護(hù)蛋白質(zhì)不被破壞和增強(qiáng)其溶解性。
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問(wèn):His標(biāo)簽蛋白鎳柱純化有雜帶怎么辦？1.樣品本身的的屬性，His蛋白容易被體系中的蛋白酶降解時(shí)，此時(shí)就要在樣品中加入蛋白酶抑制劑。避免在純化過(guò)程中His蛋白被降解，呈現(xiàn)出蛋白純化后純度下降。
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一些重要決定需要提前考慮以便優(yōu)化后續(xù)的純化。研究者需要考慮蛋白質(zhì)的最終用途（例如治療性生物藥，酶測(cè)定，結(jié)構(gòu)研究，抗體生成），因?yàn)檫@將決定最終蛋白質(zhì)制備所需的量和純度。盡管蛋白質(zhì)表達(dá)的詳細(xì)討論超出本文范圍，但是在這一點(diǎn)上仍有幾個(gè)值得考慮的基本點(diǎn)，因?yàn)樗鼈冎苯佑绊懞罄m(xù)的蛋白純化。
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His-Tag純化時(shí)金屬螯合介質(zhì)的選擇：1、科研微量制備——Ni Seplife HP（IDA)，此層析填料分辨率高，科研微量制備可用此填料純化，純度更高。2、樣品中含有DTT或EDTA——Ni Seplife FF(TED),此填料可以耐受100mM的EDTA及10mM的DTT,樣品中含有EDTA及DTT時(shí)無(wú)需換液直接過(guò)鎳柱純化。3、樣品中含有8M尿素（6M鹽酸胍）——Ni Seplife FF(NTA),IDA耐受性差，TED結(jié)合力弱，在含有高濃度尿素時(shí)結(jié)合效率差，所以含有變性劑的樣品首選IMAC的鎳柱。