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發布時間：2023-08-11 01:45:42
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金屬螯合親和層析介質：組氨酸（His）的殘基上帶有一個咪唑基團，可以和Ni2+,Co2+等過渡金屬離子形成配位鍵而選擇性的結合在金屬離子上，這些金屬離子能夠用螯合配體固定在層析介質上，因此帶有組氨酸標簽的蛋白在經過裝配了金屬離子的層析介質時可以選擇性的結合在介質上，而其他的雜質蛋白則不能結合或者僅能微弱結合。結合在介質上的HIS標簽蛋白可以通過提高緩沖液中的咪唑濃度進行競爭性洗脫，從而得到較高純度的HIS標簽蛋白。
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用Seplife Suncore 700多模式層析介質進行粗純，小于700KD的HCP,HCD，培養基組分等物質進入多模式介質的活性內核區域，和介質以靜電力，疏水作用，范德華力等結合，而慢病毒由于分子尺寸大，被排阻在介質的惰性層以外流穿而過，從而實現分離。
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溶菌緩沖液和純化工藝的前期步驟中常常會添加蛋白酶抑制劑以防止目標蛋白質被內源性蛋白酶酶解。而純化工藝的后期一般不用再添加這些蛋白酶抑制劑，因為此時幾乎所有的蛋白酶都已經從目標蛋白質分離出去。蛋白質的保存緩沖液中通常要添加金屬螯合劑，如EDTA或EGTA。這些金屬螯合劑與 Mg2+結合以防止目標蛋白質被所含的金屬蛋白酶分解。還有一些其他的添加劑，主要是用來保護蛋白質不被破壞和增強其溶解性。
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由細胞的貼壁、生長狀態、細胞密度及消化后重新貼壁情況觀察可以得出，Vero細胞在藍曉科技微載體Seplife LX-MC-Dex1上能夠生長，胰酶消化后細胞分散情況符合標準，是病毒類生物制品制備之利器。層析介質國產化替代，藍曉科技有多糖微球介質，大孔聚合物微球介質，多模式介質等，全力助力生物制品下游工藝過程中層析介質的國產化替代。
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建立蛋白質純化工藝時，最重要的是需要考慮純化得到的蛋白質應能滿足其后續應用要求。蛋白質的含量及純度都必須滿足應用要求。而且，因為后續應用需要的是保持良好折疊結構的活性蛋白質，因此蛋白質活性的相關信息也需要考慮。在純化及后續的保存過程中，很多處理方法都會對蛋白質的性質產生影響，如蛋白質的去折疊、聚集、降解和失活等。制定詳細計劃，在最短時間內完成蛋白質純化，并在最穩定的條件下進行保存才算是成功地完成了其整個純化過程。