河南層析填料廠家供應
發布時間：2023-06-08 01:48:15
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預活化介質：環氧活化層析介質是將環氧基團鍵合在瓊脂糖FF上形成的一種活性中間體，可直接偶聯配基制備各類分離介質，用于生物大分子純化分離。溴化氫活化瓊脂糖層析介質是一種活化后的中間體，通過溴化氫和瓊脂糖上面的羥基反應生成活化的氰酸酯基團。蛋白質，多肽，氨基酸等可以偶聯到溴化氫活化4B/6B瓊脂糖介質上，應用較為廣泛。
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層析體系需要優化，緩沖體系的pH要在7.5-8.3之間，添加200-500mM氯化鈉減少非特異性吸附，上樣完后要徹底清洗，保證層析填料孔內，顆粒間未結合的蛋白全部洗出后，在開始洗脫，保證上完樣后，清洗在10CV以上。洗脫過程需要摸索咪唑的強度梯度，用連續咪唑梯度來摸索洗脫濃度。
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樣品的組份應滿足層析工藝且對層析填料的性能沒有影響，必要時可以用藍曉科技的凝膠過濾介質Seplife G-25 M介質對樣品進行置換體系處理。
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金屬螯合親和層析介質：組氨酸（His）的殘基上帶有一個咪唑基團，可以和Ni2+,Co2+等過渡金屬離子形成配位鍵而選擇性的結合在金屬離子上，這些金屬離子能夠用螯合配體固定在層析介質上，因此帶有組氨酸標簽的蛋白在經過裝配了金屬離子的層析介質時可以選擇性的結合在介質上，而其他的雜質蛋白則不能結合或者僅能微弱結合。結合在介質上的HIS標簽蛋白可以通過提高緩沖液中的咪唑濃度進行競爭性洗脫，從而得到較高純度的HIS標簽蛋白。
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