甘肅蛋白純化產(chǎn)地貨源公司
發(fā)布時(shí)間：2023-05-21 01:48:59
甘肅蛋白純化產(chǎn)地貨源公司
1、樣品中含有8M尿素（6M鹽酸胍）——Ni Seplife FF(NTA),IDA耐受性差，TED結(jié)合力弱，在含有高濃度尿素時(shí)結(jié)合效率差，所以含有變性劑的樣品首選IMAC的鎳柱。2、含有Cys/Try殘基蛋白——含有Cys/Try 殘基的蛋白和鎳層析填料的結(jié)合力弱，此時(shí)可以選擇IMAC Seplife FF(IAD)的填料螯合Cu離子進(jìn)行親和純化（如烏司他丁可用此填料純化）
甘肅蛋白純化產(chǎn)地貨源公司
表達(dá)體系對(duì)蛋白純化的影響：開始純化蛋白前應(yīng)先制備初始樣品。真正進(jìn)行蛋白純化的操作之前，首要考慮是目的蛋白的來源。樣品來源可為原始樣品，例如肝臟，肌肉或腦組織。當(dāng)前，更為常見的是從重組來源的樣品純化蛋白質(zhì)。
甘肅蛋白純化產(chǎn)地貨源公司
抗體純化親和層析介質(zhì)：重組蛋白A可特異性與抗體的Fc區(qū)結(jié)合，用于單抗或多抗的分離純化，經(jīng)過一步層析，就可從腹水，血清或培養(yǎng)液等樣品中得到高純度的抗體。重組蛋白G可用于分離純化細(xì)胞培養(yǎng)液或細(xì)胞提取物中不同屬抗體或抗體的Fc片段，多位點(diǎn)活化偶聯(lián)減少了配體的泄露，用于IgG單克隆抗體的實(shí)驗(yàn)室規(guī)模和工業(yè)化大規(guī)模純化，能迅速處理大體積樣品。
甘肅蛋白純化產(chǎn)地貨源公司
洗脫峰雜質(zhì)多，可能原因：非特異性結(jié)合，清洗不徹底，降解等。解決方法：蛋白純化過程加蛋白抑制劑防止降解，上樣完后要徹底清洗，加一定的NaCl和咪唑減少非特異性結(jié)合。使用幾次后，介質(zhì)結(jié)合效率降低，柱效降低。可能原因：介質(zhì)上沉積大量雜質(zhì)等。解決方法：徹底清洗，IDA/IMAC脫鎳再生處理。
甘肅蛋白純化產(chǎn)地貨源公司
疏水作用層析（Hydrophobic Interaction Chromatography，HIC）是根據(jù)分子表面疏水性差別來分離蛋白質(zhì)和多肽等生物大分子的一種較為常用的方法。由于蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)受到不同緩沖液環(huán)境的影響，而發(fā)生立體結(jié)構(gòu)發(fā)生改變。疏水層析填料利用這種結(jié)構(gòu)的改變，在含鹽的水溶液體系中，借助于層析填料與蛋白質(zhì)分子之間的疏水作用達(dá)到吸附活性蛋白分子的目的，這種層析技術(shù)稱為疏水作用層析。