福建層析介質批發價格
發布時間：2023-03-11 01:54:40
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質粒DNA純化親和層析介質：Plasmid Seplife LX層析介質是藍曉科技自主研發的一種新型高度交聯的親硫芳香族瓊脂糖層析介質，利用配基的嗜硫吸附，適用于分離純化閉環的超螺旋質粒DNA，廣泛應用于基因治療和DNA疫苗的開發應用。該層析介質具有高流速、低反壓、非特異性吸附低、良好的親水性、化學穩定性和機械性特點，方便進行規模放大，可縮短生產時間，提高生產效率。
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His-Tag純化時金屬螯合介質的選擇：1、科研微量制備——Ni Seplife HP（IDA)，此層析填料分辨率高，科研微量制備可用此填料純化，純度更高。2、樣品中含有DTT或EDTA——Ni Seplife FF(TED),此填料可以耐受100mM的EDTA及10mM的DTT,樣品中含有EDTA及DTT時無需換液直接過鎳柱純化。3、樣品中含有8M尿素（6M鹽酸胍）——Ni Seplife FF(NTA),IDA耐受性差，TED結合力弱，在含有高濃度尿素時結合效率差，所以含有變性劑的樣品首選IMAC的鎳柱。
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DEAE-52和DEAE-FF有什么區別：兩者都是弱陰離子填料。DEAE-52是纖維素基質，平均粒徑50um，DEAE-FF是瓊脂糖基質，中心粒徑90um。同樣的上樣流速前者反壓明顯大于后者，無法滿足工業化生產需求，現在市面上很少有提供DEAE-52的，工業化生產都在用DEAE-FF或者更高剛性的，兩者選擇的話，強烈推薦使用DEAE-FF。
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層析體系需要優化，緩沖體系的pH要在7.5-8.3之間，添加200-500mM氯化鈉減少非特異性吸附，上樣完后要徹底清洗，保證層析填料孔內，顆粒間未結合的蛋白全部洗出后，在開始洗脫，保證上完樣后，清洗在10CV以上。洗脫過程需要摸索咪唑的強度梯度，用連續咪唑梯度來摸索洗脫濃度。
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洗脫峰雜質多，可能原因：非特異性結合，清洗不徹底，降解等。解決方法：蛋白純化過程加蛋白抑制劑防止降解，上樣完后要徹底清洗，加一定的NaCl和咪唑減少非特異性結合。使用幾次后，介質結合效率降低，柱效降低。可能原因：介質上沉積大量雜質等。解決方法：徹底清洗，IDA/IMAC脫鎳再生處理。