河北蛋白純化批量采購(gòu)供應(yīng)商
發(fā)布時(shí)間：2023-03-10 01:54:35
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1、樣品中含有8M尿素（6M鹽酸胍）——Ni Seplife FF(NTA),IDA耐受性差，TED結(jié)合力弱，在含有高濃度尿素時(shí)結(jié)合效率差，所以含有變性劑的樣品首選IMAC的鎳柱。2、含有Cys/Try殘基蛋白——含有Cys/Try 殘基的蛋白和鎳層析填料的結(jié)合力弱，此時(shí)可以選擇IMAC Seplife FF(IAD)的填料螯合Cu離子進(jìn)行親和純化（如烏司他丁可用此填料純化）
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質(zhì)粒DNA純化親和層析介質(zhì)：Plasmid Seplife LX層析介質(zhì)是藍(lán)曉科技自主研發(fā)的一種新型高度交聯(lián)的親硫芳香族瓊脂糖層析介質(zhì)，利用配基的嗜硫吸附，適用于分離純化閉環(huán)的超螺旋質(zhì)粒DNA，廣泛應(yīng)用于基因治療和DNA疫苗的開(kāi)發(fā)應(yīng)用。該層析介質(zhì)具有高流速、低反壓、非特異性吸附低、良好的親水性、化學(xué)穩(wěn)定性和機(jī)械性特點(diǎn)，方便進(jìn)行規(guī)模放大，可縮短生產(chǎn)時(shí)間，提高生產(chǎn)效率。
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慢病毒純化相關(guān)層析介質(zhì)：每一步工序后，在開(kāi)始下一步工序都要考慮病毒粒子濃度及緩沖液體系的匹配性，必要的情況下都要進(jìn)行超濾過(guò)程調(diào)整病毒粒子濃度及置換緩沖液。層析過(guò)程中，體系pH7.0-9.0更利于HCP和多模式及陰離子交換介質(zhì)的結(jié)合。
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層析體系需要優(yōu)化，緩沖體系的pH要在7.5-8.3之間，添加200-500mM氯化鈉減少非特異性吸附，上樣完后要徹底清洗，保證層析填料孔內(nèi)，顆粒間未結(jié)合的蛋白全部洗出后，在開(kāi)始洗脫，保證上完樣后，清洗在10CV以上。洗脫過(guò)程需要摸索咪唑的強(qiáng)度梯度，用連續(xù)咪唑梯度來(lái)摸索洗脫濃度。
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凝膠過(guò)濾層析（SEC)：凝膠過(guò)濾又稱為分子篩及體積排阻，凝膠過(guò)濾層析是根據(jù)蛋白質(zhì)具有不同的水力學(xué)半徑將它們進(jìn)行分離，該數(shù)據(jù)主要通過(guò)測(cè)量分子尺寸和形狀兩方面信息獲得。與其他層析過(guò)程不同的是，蛋白質(zhì)不與SEC介質(zhì)相結(jié)合，而是依靠它們通過(guò)惰性介質(zhì)的速度不同來(lái)完成分離。
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組氨酸（His）的殘基上帶有一個(gè)咪唑基團(tuán)，可以和Ni2+,Co2+等過(guò)渡金屬離子形成配位鍵而選擇性的結(jié)合在金屬離子上，這些金屬離子能夠用螯合配體固定在層析介質(zhì)上，因此帶有組氨酸標(biāo)簽的蛋白在經(jīng)過(guò)裝配了金屬離子的層析介質(zhì)時(shí)可以選擇性的結(jié)合在介質(zhì)上，而其他的雜質(zhì)蛋白則不能結(jié)合或者僅能微弱結(jié)合。結(jié)合在介質(zhì)上的HIS標(biāo)簽蛋白可以通過(guò)提高緩沖液中的咪唑濃度進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)性洗脫，從而得到較高純度的HIS標(biāo)簽蛋白。