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發布時間：2023-03-07 01:54:58
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在蛋白純化開始之前要對其進行穩定性研究，溫度，pH，離子強度，添加劑及濃度的穩定性研究一定要在純化蛋白之前就進行有效可靠的驗證。對溫度敏感型蛋白的純化制備盡可能在4度的環境中進行。同時對耐高溫的蛋白如糖化酶，可以利用此特性來在高溫下讓其它雜蛋白變性沉淀，目標蛋白活性無影響這一特性來純化蛋白。蛋白存在體系避免劇烈變化，在包涵體復性的過程有深刻體系，梯度逐漸減少變性劑可提高復性率。所以我們在純化蛋白時就要避免體系的劇烈變化。親和層析純化蛋白時，大多需要較低的pH洗脫，在收集洗脫峰的容器中墊緩沖液（常用1M的Tris)，讓洗脫下來的蛋白迅速恢復到中性環境。避免純化過程中蛋白發生沉淀。
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親和層析捕獲后，進一步用強陽離子交換層析SP Seplife Large Scale層析介質繼續純化捕獲的單抗，進一步去除少量的HCP,HCD及第1步親和層析捕獲時rProtein A親和介質脫離的親和配基rProtein A。強陽離子交換層析后，通過調pH的方式用pH3.7-3.8的環境進行病毒滅活。低pH病毒滅活后，在通過陰離子交換層析Q Seplife Large Scale流穿模式，讓單抗流穿，層析介質吸附痕量的雜質進一步純化。
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Seplife?IEX離子交換層析填料是采用獨有的聚合物合成技術制備出以聚甲基丙烯酸酯為骨架的微球。該聚合物微球經過表面親水性改造以增加親水性，再通過化學合成的方法鍵合不同的離子交換基團。由于其良好的親水性和較好的物理、化學穩定性及剛性結構，使得離子交換層析填料具有良好的生物相溶性及使用壽命，并提高純化效率。
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溶菌緩沖液和純化工藝的前期步驟中常常會添加蛋白酶抑制劑以防止目標蛋白質被內源性蛋白酶酶解。而純化工藝的后期一般不用再添加這些蛋白酶抑制劑，因為此時幾乎所有的蛋白酶都已經從目標蛋白質分離出去。蛋白質的保存緩沖液中通常要添加金屬螯合劑，如EDTA或EGTA。這些金屬螯合劑與 Mg2+結合以防止目標蛋白質被所含的金屬蛋白酶分解。還有一些其他的添加劑，主要是用來保護蛋白質不被破壞和增強其溶解性。