廣東蛋白純化產地貨源公司
發布時間：2023-03-02 01:55:14
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層析填料被污染或老化：隨著填料的使用，一些雜質的積累會使層析填料的孔徑發生變化（如堵塞，非特異性吸附積累，微生物污染，破碎等），導致其排阻能力發生偏差而影響分離度。此時可對填料進行CIP清洗，若清洗后還不能達到分離要求，就要更換新的填料。
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蛋白質純化工藝中的其他因素也會對蛋白質的穩定性產生影響。對蛋白質的處理步驟越少越好，在最短時間內采用最少步驟的純化工藝才能保證得到最高產率的活性蛋白質。而且，在整個純化過程中，蛋白質最好都保持在低溫狀態。一般純化過程都在4°C進行,因為這個溫度既可以降低酶解速度（在含有蛋白酶的情況下），又可以保證蛋白質的結構完整性。
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Seplife?IEX離子交換層析填料是采用獨有的聚合物合成技術制備出以聚甲基丙烯酸酯為骨架的微球。該聚合物微球經過表面親水性改造以增加親水性，再通過化學合成的方法鍵合不同的離子交換基團。由于其良好的親水性和較好的物理、化學穩定性及剛性結構，使得離子交換層析填料具有良好的生物相溶性及使用壽命，并提高純化效率。
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親和層析捕獲后，進一步用強陽離子交換層析SP Seplife Large Scale層析介質繼續純化捕獲的單抗，進一步去除少量的HCP,HCD及第1步親和層析捕獲時rProtein A親和介質脫離的親和配基rProtein A。強陽離子交換層析后，通過調pH的方式用pH3.7-3.8的環境進行病毒滅活。低pH病毒滅活后，在通過陰離子交換層析Q Seplife Large Scale流穿模式，讓單抗流穿，層析介質吸附痕量的雜質進一步純化。
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層析體系需要優化，緩沖體系的pH要在7.5-8.3之間，添加200-500mM氯化鈉減少非特異性吸附，上樣完后要徹底清洗，保證層析填料孔內，顆粒間未結合的蛋白全部洗出后，在開始洗脫，保證上完樣后，清洗在10CV以上。洗脫過程需要摸索咪唑的強度梯度，用連續咪唑梯度來摸索洗脫濃度。