云南層析填料批發(fā)多少錢(qián)
發(fā)布時(shí)間：2023-01-22 01:56:27
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His-Tag純化時(shí)金屬螯合介質(zhì)的選擇：1、科研微量制備——Ni Seplife HP（IDA)，此層析填料分辨率高，科研微量制備可用此填料純化，純度更高。2、樣品中含有DTT或EDTA——Ni Seplife FF(TED),此填料可以耐受100mM的EDTA及10mM的DTT,樣品中含有EDTA及DTT時(shí)無(wú)需換液直接過(guò)鎳柱純化。3、樣品中含有8M尿素（6M鹽酸胍）——Ni Seplife FF(NTA),IDA耐受性差，TED結(jié)合力弱，在含有高濃度尿素時(shí)結(jié)合效率差，所以含有變性劑的樣品首選IMAC的鎳柱。
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DEAE-52和DEAE-FF有什么區(qū)別：兩者都是弱陰離子填料。DEAE-52是纖維素基質(zhì)，平均粒徑50um，DEAE-FF是瓊脂糖基質(zhì)，中心粒徑90um。同樣的上樣流速前者反壓明顯大于后者，無(wú)法滿(mǎn)足工業(yè)化生產(chǎn)需求，現(xiàn)在市面上很少有提供DEAE-52的，工業(yè)化生產(chǎn)都在用DEAE-FF或者更高剛性的，兩者選擇的話(huà)，強(qiáng)烈推薦使用DEAE-FF。
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紅色染料親和層析介質(zhì)：紅色染料親和介質(zhì)是將活性紅120共價(jià)結(jié)合到高流速瓊脂糖凝膠微球上的一種親和層析介質(zhì)，活性紅120是一個(gè)多環(huán)染料，與自然產(chǎn)生的NADP+具有某些結(jié)構(gòu)的相似性，可以強(qiáng)烈并且特異性結(jié)合寬范圍的蛋白質(zhì)，如乳酸脫氫酶。能與紅色染料特異性結(jié)合的蛋白是由于它們需要核苷酸輔助因子。其他一些蛋白，例如白蛋白，脂蛋白，凝血因子和干擾素，是以非特異性方式與紅色染料相結(jié)合的，如芳香環(huán)陰離子配基的靜電力相互作用或者疏水鍵的相互作用。
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His-Tag融合蛋白純化常見(jiàn)問(wèn)題：1.His標(biāo)簽蛋白不和介質(zhì)結(jié)合。a可能原因：超聲功率不合適（太大，蛋白碳化，太小，蛋白沒(méi)完全釋放)。解決方法：改變超聲功率或者其它方法破碎細(xì)胞。b.樣品或緩沖液不合適。解決方法：確保緩沖液中螯合劑，還原劑，咪唑濃度不是很高。c.His標(biāo)簽暴露不完全。解決方法：在緩沖液中加變性劑（4-8M尿素，4-6M鹽酸胍），然后用IMAC介質(zhì)純化。d.His標(biāo)簽丟失。