安徽蛋白純化廠家供應(yīng)
發(fā)布時(shí)間：2022-12-15 01:57:14
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疏水作用層析（Hydrophobic Interaction Chromatography，HIC）是根據(jù)分子表面疏水性差別來分離蛋白質(zhì)和多肽等生物大分子的一種較為常用的方法。由于蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)受到不同緩沖液環(huán)境的影響，而發(fā)生立體結(jié)構(gòu)發(fā)生改變。疏水層析填料利用這種結(jié)構(gòu)的改變，在含鹽的水溶液體系中，借助于層析填料與蛋白質(zhì)分子之間的疏水作用達(dá)到吸附活性蛋白分子的目的，這種層析技術(shù)稱為疏水作用層析。
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1、樣品中含有8M尿素（6M鹽酸胍）——Ni Seplife FF(NTA),IDA耐受性差，TED結(jié)合力弱，在含有高濃度尿素時(shí)結(jié)合效率差，所以含有變性劑的樣品首選IMAC的鎳柱。2、含有Cys/Try殘基蛋白——含有Cys/Try 殘基的蛋白和鎳層析填料的結(jié)合力弱，此時(shí)可以選擇IMAC Seplife FF(IAD)的填料螯合Cu離子進(jìn)行親和純化（如烏司他丁可用此填料純化）
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CHO細(xì)胞培養(yǎng)后先經(jīng)過離心的方式去除細(xì)胞及細(xì)胞碎片，也可用微濾或者深層過濾的方式去除細(xì)胞及細(xì)胞碎片。去除細(xì)胞和細(xì)胞碎片后用rProtein A親和層析介質(zhì)經(jīng)親和層析捕獲，把單抗從培養(yǎng)液中快速的捕獲出來，此步驟可以去除大量的HCP，單抗去折疊片段，病毒及HCD和培養(yǎng)基組份物質(zhì)。
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層析填料上端，和柱頭分配器間的體積太大，大中大型層析柱使用過程中，液距控制在0.5cm以內(nèi)，避免影響整個(gè)層析過程。更多關(guān)系His標(biāo)簽蛋白純化的問題請(qǐng)聯(lián)系蘇州聯(lián)系生物。電話0512-65160522